[所屬分類:GB 5413] [發(fā)布時(shí)間:2019-8-12] [發(fā)布人:管理員] [閱讀次數(shù):] [返回]

中 華 人 民 共 和 國 國 家 標(biāo) 準(zhǔn)
GB 5413.16—2010
中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部 發(fā)布
2010-03-26 發(fā)布 2010-06-01 實(shí)施
食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)
嬰幼兒食品和乳品中葉酸（葉酸鹽活性）
的測(cè)定
National food safety standard
Determination of folic acid (folate activity) in foods for infants and young children,
milk and milk products

GB 5413.16—2010
I
前 言
本標(biāo)準(zhǔn)代替 GB/T 5413.16-1997《嬰幼兒配方食品和乳粉 葉酸（葉酸鹽活性）測(cè)定》。
本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T 5413.16-1997相比，主要變化如下：
——對(duì)磷酸鹽緩沖液作了調(diào)整；
——增加了米粉的處理方法；
——增加了光密度法測(cè)定步驟。
本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：
——GB 5413-1985、 GB/T 5413.16-1997。

GB 5413.16—2010
1
食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)
嬰幼兒食品和乳品中葉酸（葉酸鹽活性）的測(cè)定
1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中葉酸（葉酸鹽活性）的測(cè)定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒食品和乳品中葉酸（葉酸鹽活性）的測(cè)定。
2 規(guī)范性引用文件
本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對(duì)于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本
適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
3 原理
利用干酪乳桿菌（Lactobacillus casei） ATCC 7469 對(duì)葉酸的特異性，在含有葉酸的樣品中生長產(chǎn)生
的酸度和形成的光密度來測(cè)定葉酸的含量。
4 試劑和材料
除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的二級(jí)水。
4.1 雞胰腺： 稱取 100 mg 干燥的雞胰腺， 加 20 mL 蒸餾水， 攪拌 15 min， 離心 10 min（3000 轉(zhuǎn)/分鐘） ，
取上清液，臨用前配制。
4.2 0.9 %生理鹽水：稱取 9.0 g 氯化鈉溶解于 1000 mL 水中，分裝于具塞試管中，每管 10 mL， 121℃
滅菌 15 min。每周準(zhǔn)備一次。
4.3 磷酸鹽緩沖液
4.3.1 磷酸鹽緩沖液Ⅰ （0.05 mol/L）：稱取 5.85 g 磷酸二氫鉀， 1.22 g 磷酸氫二鉀，用 1000 mL 水溶
解。臨用前按 0.5 g/100 mL 加入抗壞血酸。
4.3.2 磷酸鹽緩沖液Ⅱ （用于谷物及谷物制品前處理）：稱取 14.2 g 磷酸氫二鈉，用 1000 mL 水溶解。
臨用前按 1.0 g/100 mL 加入抗壞血酸，用氫氧化鈉溶液 A（4.16）調(diào) pH 至 7.8±0.1。
4.3.3 磷酸鹽緩沖液 III（用于谷物及谷物制品測(cè)試）：稱取 14.2 g 磷酸氫二鈉，用 1000 mL 水溶解。
臨用前按 1.0 g/100 mL 加入抗壞血酸，用氫氧化鈉溶液 A（4.16）調(diào) pH 至 6.8±0.1。
4.3.4 磷酸鹽緩沖液Ⅳ （0.1 mol/L）（用于谷物及谷物制品標(biāo)準(zhǔn)溶液制備）：溶解 13.61 g 磷酸二氫鉀
于水中稀釋到 1000 mL。用氫氧化鉀溶液（4.10）調(diào) pH 至 7.0±0.1。
4.4 葉酸標(biāo)準(zhǔn)品。
4.5 氨水（10.8 %）。
4.6 甲苯（C7H8）。
4.7 抗壞血酸（C6H8O6）。
4.8 菌株：干酪乳桿菌（Lactobacillus casei） ATCC 7469。

GB 5413.16—2010
2
4.9 培養(yǎng)基
4.9.1 乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基：胨化乳 15 g，酵母浸膏 5 g，葡萄糖 10 g，番茄汁 100 mL，磷酸二氫鉀
2 g，聚山梨糖單油酸酯 1 g，瓊脂 10 g，加蒸餾水至 1000 mL，調(diào) pH 至 6.8 ± 0.2（20 ℃ ～25 ℃ ）。 121℃
高壓滅菌 15min，備用。
4.9.2 乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基：胨化乳 15 g，酵母浸膏 5 g，葡萄糖 10 g，番茄汁 100 mL，磷酸二氫鉀
2 g，聚山梨糖單油酸酯 1 g，加蒸餾水至 1000 mL，調(diào) pH 至 6.8 ± 0.2（20 ℃ ～25 ℃ ）。 121℃ 高壓滅
菌 15min，備用。
4.9.3 葉酸測(cè)定用培養(yǎng)基：酪蛋白胨 10 g，葡萄糖 40 g，乙酸鈉 40 g，磷酸氫二鉀 1 g，磷酸二氫鉀 1
g， DL-色氨酸 0.2 g， L-天門冬氨酸 0.6 g， L-半胱氨酸鹽酸鹽 0.5 g，硫酸腺嘌呤 10 mg，鹽酸鳥嘌呤 10
mg，尿嘧啶 10 mg，黃嘌呤 20 mg，聚山梨糖 0.1 g，谷光甘肽 5 mg，硫酸鎂 0.4 g，氯化鈉 20 mg，硫
酸亞鐵 20 mg，硫酸錳 15 mg，核黃素 1 mg， p-氨基苯甲酸 2 mg，維生素 B6 4mg，鹽酸硫胺素 400 μg，
泛酸鈣 800 μg，煙酸 800 μg，生物素 20 μg，加蒸餾水至 1000 mL，調(diào) pH 至 6.7 ± 0.1（20 ℃ ～25 ℃ ）。
注： 市售商業(yè)化合成培養(yǎng)基效果更穩(wěn)定。
4.10 氫氧化鉀溶液（4 mol/L）：稱取 224 g 氫氧化鉀于 1000 mL 燒杯中，用 400 mL 水溶解，冷卻至
室溫后，轉(zhuǎn)移至 1000 mL 容量瓶中，用水定容。
4.11 木瓜蛋白酶溶液： 1 g 蛋白酶（活力≥6000 U/mg， pH 6.0 ± 0.1， 40 ℃）溶于 100 mL 磷酸鹽緩沖
液Ⅰ（4.3.1）中。臨用前配制。
4.12 α-淀粉酶溶液： 1 g α-淀粉酶（1.5 U/mg）溶于 100 mL 磷酸鹽緩沖液Ⅰ（4.3.1）中。臨用前配制。
4.13 0.22 μm 滅菌濾膜。
4.14 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
4.14.1 葉酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液（500 μg/mL）：稱取 55 mg～56 mg（精確至 0.1 mg）葉酸標(biāo)準(zhǔn)品（4.4），用
50 mL 蒸餾水轉(zhuǎn)入 100 mL 容量瓶中，加 2 mL 氨水（4.5）。溶液制備后，按式（1）計(jì)算溶液的體積，
要求貯備液中葉酸鹽的濃度為 500 μg/mL：
貯備液體積（mL） =
100 500
1000
×
m× × c
或簡(jiǎn)化為： 貯備液體積（mL） =
50
m× c
……………………………………………… (1)
式中：
m——葉酸標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量，單位為毫克（mg）；
c——葉酸標(biāo)準(zhǔn)品的純度，單位為克每百克（g/100 g）。
用水稀釋溶液至刻度，用吸管加水至計(jì)算要求的體積，充分混合，放入棕色試劑瓶中 2 ℃～4 ℃冰
箱冷藏，保存期為 4 個(gè)月。
4.14.2 葉酸標(biāo)準(zhǔn)中間液（50 μg/mL）：吸取 10 mL 葉酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液（4.14.1）于 100 mL 棕色容量瓶
中，用水定容至刻度，充分混勻， 2 ℃～4 ℃冰箱冷藏，保存期為 1 個(gè)月。
4.14.3 葉酸標(biāo)準(zhǔn)工作液（0.05 ng/mL， 0.1 ng/mL）：吸取 1 mL 葉酸標(biāo)準(zhǔn)中間液（4.14.2）于 100 mL
棕色容量瓶中，用水定容至刻度，混合。再吸該液 1 mL 于 100 mL 棕色容量瓶中，定容，混合。 從上
液中分別吸取 5 mL 于 250 mL 和 500 mL 棕色容量瓶中，用磷酸鹽緩沖液Ⅰ（4.3.1）定容到刻度，混勻，
即為高濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液（0.1 ng/mL）和低濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液（0.05 ng/mL）。臨用前配制。
4.15 鹽酸（1 mol/L）：量取 83.0 mL 鹽酸溶于水中，冷卻后定容至 1000 mL。

GB 5413.16—2010
3
4.16 氫氧化鈉溶液 A（4 mol/L）：稱取 160 g 氫氧化鈉于 1000 mL 燒杯中，用 400 mL 水溶解，冷卻
至室溫后，轉(zhuǎn)移至 1000 mL 容量瓶中，用水定容。
4.17 氫氧化鈉溶液 B（0.1 mol/L）：吸取 2.5 mL 氫氧化鈉溶液 A（4.16）轉(zhuǎn)移至 100 mL 容量瓶中用
水定容。
4.18 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（0.1 mol/L ± 0.0002 mol/L）：稱取 4 g（精確至 0.0001 g）氫氧化鈉用水
稀釋至 1000 mL，用鄰苯二甲酸氫鉀標(biāo)定。保存此溶液的容器要密封，以防二氧化碳滲入。
4.18.1 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定：稱取約 0.18 g（精確至 0.0001 g）于 105 ℃ ～110 ℃ 烘至恒重的鄰
苯二甲酸氫鉀，用 50 mL 除二氧化碳的水溶于錐形瓶中，加兩滴 5 g/L 的酚酞指示劑，用配好的氫氧化
鈉溶液滴定至粉紅色，同時(shí)作空白實(shí)驗(yàn)。按式（2）計(jì)算氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度：
c=
( ) 0.2042
m
V1 -V2 ×
……………………………………………………(2)
式中：
c——?dú)溲趸�鈉的濃度，單位為摩爾每升（mol/L）；
m——稱取的鄰苯二甲酸氫鉀的質(zhì)量，單位為克（g）；
V1——?dú)溲趸�鈉溶液的用量，單位為毫升（mL）；
V2——空白試驗(yàn)氫氧化鈉溶液的用量，單位為毫升（mL）。
4.18.2 酚酞溶液：取 0.5 g 酚酞溶于 75 mL 體積分?jǐn)?shù)為 95 %的乙醇中，加入 20 mL 水，再加入氫氧
化鈉溶液（4.18），直至加入一滴立即變成粉紅色，再用水定容至 100 mL。
4.19 溴麝香草酚藍(lán)指示劑：稱取 0.1 g 溴麝香草酚藍(lán)于研缽中，加入 1.6 mL 氫氧化鈉溶液 B（4.17）
研磨，加少許水至完全溶解，轉(zhuǎn)移至 250 mL 容量瓶中用水定容。
5 儀器和設(shè)備
5.1 pH 計(jì)：精度為 0.01。
5.2 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥2000 轉(zhuǎn)/分鐘。
5.3 分光光度儀。
5.4 天平：感量為 0.1 mg。
5.5 生化培養(yǎng)箱： 36 ℃ ±1 ℃
5.6 滴定管：分刻度值為 0.1 mL。
5.7 渦旋振蕩器。
6 分析步驟
6.1 測(cè)試菌液的制備
6.1.1 干酪乳桿菌（Lactobacillus casei） ATCC 7469 凍干菌粉轉(zhuǎn)入乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基（4.9.2） 中， 36
℃ ±1 ℃ 培養(yǎng) 24 h 后，轉(zhuǎn)接至乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基（4.9.1）試管中，再 36 ℃ ±1 ℃ 培養(yǎng) 24 h。培養(yǎng)好的
乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基（4.9.1）試管的培養(yǎng)物作為貯備菌種。

GB 5413.16—2010
4
6.1.2 從貯備菌種培養(yǎng)基上分別轉(zhuǎn)接到三個(gè)乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基（4.9.1）試管中，放入培養(yǎng)箱中 36 ℃ ±1
℃ 培養(yǎng) 24 h。每月轉(zhuǎn)接一次，作為月接種管貯于冰箱中。每月定期從月接種管中重新接種 3 個(gè)轉(zhuǎn)接管保
存新菌株。
6.1.3 從月接種的培養(yǎng)管中的一支再接種一支乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基（4.9.1）試管， 36 ℃ ±1 ℃ 培養(yǎng) 24 h，
作為日接種管每日測(cè)定用。
6.1.4 從日接種管中接種一管乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基（4.9.2）， 36 ℃ ±1 ℃ 培養(yǎng) 24 h。在無菌條件下離
心該培養(yǎng)液 10 min（2000 轉(zhuǎn)/分鐘），棄去上清液。用 10 mL 生理鹽水（4.2）振蕩洗滌菌體，離心 10 min
（2000 轉(zhuǎn)/分鐘），棄去上清液，用 10 mL 生理鹽水（4.2）振蕩清洗。如前離心操作，棄去上清液。再
加 10 mL 生理鹽水（4.2），混勻。吸 1 mL 該菌懸液于 10 mL 生理鹽水（4.2）中，混勻制成測(cè)試菌液。
6.1.5 以生理鹽水（4.2）做對(duì)照，用分光光度計(jì)，于 550 nm 波長下，測(cè)測(cè)試菌液（6.1.4）的光密度
值，此值應(yīng)在 60 %～80 %之間。
6.2 試樣的制備
6.2.1 乳制品
稱取 2 g（精確至 0.0001 g）試樣（約含葉酸 5 μg）于 100 mL 燒杯中，用 25 mL～30 mL 水復(fù)原樣
品，轉(zhuǎn)入 100 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，溶液中葉酸的質(zhì)量濃度大約為 0.05 μg/mL。吸取 1 mL
該樣液和 1 mL 雞胰腺（4.1）于一個(gè) 180 mm×15 mm 的帶螺旋蓋的試管中，充分混合。加 18 mL 含抗
壞血酸的磷酸緩沖液Ⅰ （4.3.1），再加 1 mL 甲苯（4.6）。同時(shí)制備±空白對(duì)照管，吸 1 mL 蒸餾水和 1 mL
雞胰腺（4.1）于空白管中，加 18 mL 含抗壞血酸的磷酸緩沖液Ⅰ （4.3.1）及 1 mL 甲苯（4.6）。在 37 ℃
下，樣品管和空白管保溫 16 h 后，于 100 ℃ 水浴加熱 5 min。用磷酸鹽緩沖液Ⅰ （4.3.1）作適當(dāng)稀釋，
得到濃度約為 0.1 ng/mL 的葉酸鹽溶液。
若確定樣品中強(qiáng)化葉酸與原生葉酸相比所占比例很大，則可以用 1 mL 樣液加 19 mL 含抗壞血酸的
磷酸緩沖液Ⅰ （4.3.1）于 100 ℃ 水浴加熱 5 min，再用磷酸鹽緩沖液Ⅰ （4.3.1）稀釋，得到濃度約為 0.1
ng/mL 的葉酸鹽溶液。
6.2.2 谷物及谷物制品
稱取大約含 1 μg 葉酸的試樣于 150 mL 三角燒瓶中。加 20 mL pH 7.8 磷酸緩沖溶液Ⅱ （4.3.2），混
勻后加 50 mL 水和 1.0 mL 甲苯（4.6）。加蓋后 121 ℃ 15 min 滅菌，然后迅速冷卻。加 1 mL 木瓜蛋白
酶溶液（4.11），于 36 ℃ ±1 ℃ 保溫 3h 后 100 ℃ 加熱 3 min，冷卻。加 1 mL α-淀粉酶溶液（4.12）， 36 ℃
±1 ℃ 保溫 2 h 后加 4 mL 雞胰腺（4.1）， 加蓋， 36 ℃ ± 1℃ 保溫 16 h 后 100 ℃ 加熱 3 min， 冷卻。用 1 mol/L
鹽酸（4.15）調(diào) pH 至 4.5，用水稀釋定容到 100 mL。過濾得到澄清濾液，然后吸取 1 mL 澄清濾液用磷
酸鹽緩沖液 III（4.3.3）定容至 100 mL，得到濃度約為 0.1 ng/mL 的葉酸鹽溶液。
若確定樣品中強(qiáng)化葉酸與原生葉酸相比所占比例很大則可以直接在樣品中加 20 mL 0.05 mol/L 含
抗壞血酸的磷酸緩沖液Ⅱ （4.3.2）和 50 mL 水，于 121 ℃ 滅菌 15 min，然后吸取 1mL 澄清濾液，再用
0.05 mol/L 磷酸鹽緩沖液 III（4.3.3）稀釋，得到濃度約為 0.1 ng/mL 的葉酸鹽溶液。
6.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線管的制作
按表 1 順序加入蒸餾水、標(biāo)準(zhǔn)工作液（4.14.3）（測(cè)定谷物及谷物制品的標(biāo)準(zhǔn)溶液用磷酸鹽緩沖液Ⅳ
（4.3.4）代替磷酸鹽緩沖液Ⅰ （4.3.1））和葉酸測(cè)定用培養(yǎng)基（4.9.3）于培養(yǎng)管中。表 1 中每一編號(hào)需
制作 3 管。試管 S2 至 S10 中，相當(dāng)葉酸含量為 0.00 ng、 0.05 ng、 0.10 ng、 0.15 ng 、 0.20 ng、 0.25 ng、
0.30 ng、 0.40 ng、 0.50 ng。

GB 5413.16—2010
5
表 1 標(biāo)準(zhǔn)曲線管的制作

試管號(hào)	S1	S2	S3	S4	S5	S6	S7	S8	S9	S10
蒸餾水（mL）	5	5	4	3	2	1	0	2	1	0
標(biāo)準(zhǔn)溶液（mL）	0	0	1	2	3	4	5	3	4	5
培養(yǎng)基（mL）	5	5	5	5	5	5	5	5	5	5
注 1： 試管 S3～S7 中加低濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液。 注 2： 試管 S8～S10 中加高濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液。

6.4 試樣管的制作
按表 2 順序加入蒸餾水、試樣和葉酸測(cè)定用培養(yǎng)基于試管中，表中每一編號(hào)需制作 3 管。
表 2 試樣管的制作

試管號(hào)	1	2	3	4
蒸餾水（mL）	4	3	2	1
樣 品（mL）	1	2	3	4
培養(yǎng)基（mL）	5	5	5	5

6.5 滅菌
將標(biāo)準(zhǔn)曲線管和試樣管 121 ℃ 滅菌 5 min，迅速冷卻到室溫（商品化培養(yǎng)基按標(biāo)簽說明進(jìn)行滅菌)。
注：保證加熱和冷卻過程中條件均勻，滅菌管數(shù)過多或距離太近，在滅菌鍋中都可產(chǎn)生不良影響。
6.6 接種
無菌條件下每管中均加入一滴（約 50 μL）菌懸液（6.1.4），加蓋，充分振蕩混勻所有試管（標(biāo)準(zhǔn)
曲線未接種空白管 S1 除外）。
6.7 培養(yǎng)
6.7.1 酸度法： 36 ℃ ± 1 ℃ 培養(yǎng) 72 h。對(duì)每支試管進(jìn)行目測(cè)檢查，未接種管內(nèi)培養(yǎng)液應(yīng)是澄清的，標(biāo)
準(zhǔn)曲線管和試樣管中培養(yǎng)液的濁度應(yīng)有梯度。未接種管中若出現(xiàn)混濁，則測(cè)定無效。
6.7.2 光密度法：在 36 ℃ ± 1 ℃ ，培養(yǎng) 16 h～24 h。其他同 6.7.1。
6.8 測(cè)定
6.8.1 酸度法
6.8.1.1 用 10 mL 水將未接種空白管 S1 和接種空白管 S2 的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)至三角燒瓶中，以溴麝香草酚藍(lán)
（4.19）作指示劑，或用 pH 計(jì)以 pH 6.8 ± 0.2 為滴定終點(diǎn)用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（4.18）滴定標(biāo)準(zhǔn)曲
線未接種空白管 S 1 和接種空白管 S 2。記錄下消耗的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液體積。
注： 如果接種空白滴定反應(yīng)消耗的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液體積數(shù)等于或高于未接種空白水平的 1.5 mL，則測(cè)定結(jié)果
無效。
6.8.1.2 用 10 mL 水將標(biāo)準(zhǔn)曲線管和試樣管中的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)至三角燒瓶中，以溴麝香草酚藍(lán)（4.19）作
指示劑，或用 pH 計(jì)以 pH 6.8 ± 0.2 為滴定終點(diǎn)用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（4.18.1）滴定標(biāo)準(zhǔn)曲線管和試
樣管的培養(yǎng)物。記錄下消耗的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液體積。
注： 通常標(biāo)準(zhǔn)曲線管 S7 消耗的 0.1 mol/L 的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液體積數(shù)在 8 mL～12 mL 之間。
6.8.2 光密度法

GB 5413.16—2010
6
以接種空白管（表 1 中試管號(hào) S 2）作對(duì)照，取出最高濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線管 S7，振蕩 5 s，在波長 550 nm
下讀取光密度值，放回重新培養(yǎng)。 2 h 后同等條件重新測(cè)該管的光密度，如果兩次光密度的絕對(duì)差結(jié)果
≤2 %，則取出全部檢驗(yàn)管測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣的光密度。
6.9 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
以標(biāo)準(zhǔn)曲線管葉酸含量作橫坐標(biāo)， 以消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的毫升數(shù)或光密度值為縱坐標(biāo)繪制
標(biāo)準(zhǔn)曲線。
6.10 試樣管中葉酸含量的計(jì)算
按照 13.8 每個(gè)試樣管測(cè)定的消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的毫升數(shù)或光密度值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得
對(duì)應(yīng)的葉酸含量。每一編號(hào)的三個(gè)試樣管應(yīng)計(jì)算管中每毫升測(cè)定液葉酸的含量，并與其平均值相比較。
相對(duì)偏差小于 15 %的試管為有效試管，無效試樣管應(yīng)舍去，有效試樣管總數(shù)應(yīng)大于所有試樣管總數(shù)的
2/3。重新計(jì)算每一編號(hào)的有效試樣管中每毫升測(cè)定液葉酸含量的平均值，以此平均值計(jì)算全部編號(hào)試
樣管的總平均值 Cx。
注： 樣品管中葉酸含量低于 0.05 ng，高于 0.5 ng 的值應(yīng)舍去。
7 分析結(jié)果的表述
試樣中葉酸含量按式（3）計(jì)算：
X＝
m
C D EB
x 1000
100
[( × ) - ]× …………………………………………（3）
式中：
X——試樣中葉酸含量，單位為微克每百克（μg/100 g）；
Cx——6.10 中計(jì)算所得的總平均值，單位為納克（ng）；
D——樣品在處理后的稀釋因子；
EB——雞胰腺空白管中葉酸含量，單位為納克每毫升（ng/mL）；
m——樣品的質(zhì)量或體積，單位為克（g）。
以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。
8 精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不超過算術(shù)平均值的 10 %。
9 其他
本標(biāo)準(zhǔn)檢出限為 2 μg/100g