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中 華 人 民 共 和 國 國 家 標(biāo) 準(zhǔn)
GB 5413.17—2010
中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部 發(fā)布
2010-03-26 發(fā)布 2010-06-01 實施
食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)
嬰幼兒食品和乳品中泛酸的測定
National food safety standard
Determination of pantothenic acid in foods for infants and young children,
milk and milk products

GB 5413.17—2010
I
前 言
本標(biāo)準(zhǔn)第一法為等同采用國際分析家學(xué)會（AOAC） 945.74 Pantothenic Acid in Vitamin Preparations。
本標(biāo)準(zhǔn)代替GB/T 5413.17-1997《嬰幼兒配方食品和乳粉 泛酸的測定》。
本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T 5413.17-1997相比，第一法主要變化如下：
——增加了 tris 緩沖液配制方法；
——確定了測定波長；
——增加了標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制的文字描述。
第二法主要變化如下：
——更換了色譜柱；
——改變了流動相；
——增加了含淀粉類試樣進行酶解的處理方法。
本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為資料性附錄。
本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：
——GB 5413-1985、 GB/T 5413.17-1997。

GB 5413.17—2010
1
食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)
嬰幼兒食品和乳品中泛酸的測定
1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中泛酸的測定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒食品和乳品中泛酸的測定。
2 規(guī)范性引用文件
本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本
適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
第一法 微生物法
3 原理
利用植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum） ATCC 8014 對泛酸的特異性，在含有泛酸樣品中生長產(chǎn)
生的酸度和形成的光密度來測定泛酸的含量。
4 試劑和材料
除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純試劑，水為 GB/T 6682 規(guī)定的二級水。
4.1 0.9 %生理鹽水： 9.0 g 氯化鈉溶解于 1000 mL 水中，分裝于具塞試管中，每管 10 mL， 121 ℃滅菌
15 min。每周準(zhǔn)備一次。
4.2 泛酸鈣標(biāo)準(zhǔn)品。
4.3 乙酸溶液（0.2 mol/L）：吸取 12 mL 冰乙酸用水稀釋至 1000 mL。
4.4 甲苯（C7H8）。
4.5 乙酸鈉溶液（0.2 mol/L）：溶解 16.4 g 無水乙酸鈉于水中，稀釋至 1000 mL。
4.6 菌株：植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum） ATCC 8014。
4.7 培養(yǎng)基
4.7.1 乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基：光解胨 15 g，酵母浸膏 5 g，葡萄糖 10 g，番茄汁 100 mL，磷酸二氫鉀
2 g，聚山梨糖單油酸酯 1 g，瓊脂 10 g，加蒸餾水至 1000 mL，調(diào) pH 至 6.8 ± 0.2（20 ℃ ～25 ℃ ）。
4.7.2 乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基：光解胨 15 g，酵母浸膏 5 g，葡萄糖 10 g，番茄汁 100 mL，磷酸二氫鉀
2 g，聚山梨糖單油酸酯 1 g，加蒸餾水至 1000 mL，調(diào) pH 至 6.8 ±0.2（20 ℃ ～25℃ ）。
4.7.3 泛酸測定用培養(yǎng)基：葡萄糖 40 g，乙酸鈉 20 g，無維生素酸水解酪蛋白 10 g，磷酸氫二鉀 1 g，
磷酸二氫鉀 1 g， L-胱氨酸 0.4 g， L-色氨酸 0.1 g，硫酸鎂 0.4 g，氯化鈉 20 mg，硫酸亞鐵 20 mg，硫酸
錳 20 mg，硫酸腺嘌呤 20 mg，鹽酸鳥嘌呤 20 mg，尿嘧啶 20 mg，胡蘿卜素 400 μg，鹽酸硫胺素 200 μg，

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生物素 0.8 μg， p-氨基苯甲酸 200 μg，煙酸 1 mg，鹽酸吡哆醇 800 μg，聚山梨糖單油酸酯 0.1 g，加蒸
餾水至 1000 mL，調(diào) pH 至 6.7±0.1（20 ℃ ～25 ℃ ）。
4.8 Tris 緩沖液：稱取 24.2 g Trizma Base 于燒杯中，加 200 mL 水溶解。
4.9 鹽酸（0.1 mol/L）：吸取 8.3 mL 鹽酸，用水稀釋至 1000 mL。
4.10 標(biāo)準(zhǔn)溶液
4.10.1 泛酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液（40 μg/mL）：精確稱取 45 mg～55 mg 泛酸鈣標(biāo)準(zhǔn)品（4.2），溶入 500 mL
蒸餾水中，加 10 mL 乙酸溶液 （4.3），加 100 mL 乙酸鈉溶液（4.5），用水稀釋至泛酸鈣精確濃度為
43.47 μg/mL（即泛酸濃度為 40 μg/mL），加 0.5 mL 甲苯（4.4）貯于 2 ℃～4 ℃冰箱中，保存期為 4
個月。
4.10.2 泛酸中間貯備液（1 μg/mL）：取 25 mL 標(biāo)準(zhǔn)貯備液（4.10.1），加入蒸餾水 500 mL，乙酸溶
液 10 mL（4.3），乙酸鈉溶液 100 mL（4.5），再用水稀釋至 1 L。加 0.5 mL 甲苯（4.4）貯于冰箱中（2
℃～4 ℃），保存期為 1 個月。
4.10.3 泛酸標(biāo)準(zhǔn)工作液（10 ng/mL， 5 ng/mL）：吸兩次 5.0 mL 中間貯備液（4.10.2），分別用水定
容至 500 mL 和 1000 mL，臨用前配制。
5 儀器和設(shè)備
5.1 分光光度儀。
5.2 pH 計：精度為 0.01。
5.3 渦旋振蕩器。
5.4 天平：感量 0.1 mg。
5.5 生化培養(yǎng)箱： 36 ℃ ± 0.5 ℃ 。
5.6 離心機：轉(zhuǎn)速≥2000 轉(zhuǎn)/分鐘。
6 分析步驟
6.1 測試菌液的制備
6.1.1 把植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum） ATCC 8014 凍干菌粉轉(zhuǎn)入乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基（4.7.2）
試管中， 36 ℃ ± 1 ℃ 培養(yǎng) 24 h。再轉(zhuǎn)接至乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基（4.7.1）試管中， 36 ℃ ± 1 ℃ 培養(yǎng) 24 h。
培養(yǎng)好的乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基（4.7.1）試管的培養(yǎng)物作為貯備菌種。
6.1.2 從貯備菌種培養(yǎng)基上分別轉(zhuǎn)接到三個乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基（4.7.1）試管中，放入培養(yǎng)箱中 36 ℃
± 1 ℃ 培養(yǎng) 24 h。每月轉(zhuǎn)接一次，作為月接種管貯于冰箱中。每月定期從月接種管中重新接種 3 個轉(zhuǎn)接
管保存新菌株。
6.1.3 從月接種的培養(yǎng)管中的一支再接種一支乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基（4.7.1）試管， 36 ±1 ℃ ℃ 培養(yǎng) 24 h，
作為日接種管每日測定用。
6.1.4 從日接種管中接種一管乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基（4.7.2）， 36 ℃ ± 1 ℃ 培養(yǎng) 24 h。在無菌條件下離
心該培養(yǎng)液 10 min（2000 轉(zhuǎn)/分鐘），棄去上清液。用 10 mL 生理鹽水（4.1）振蕩洗滌菌體，離心 10 min
（2000 轉(zhuǎn)/分鐘），棄去上清液，用 10 mL 生理鹽水（4.1）振蕩清洗。如前離心操作，棄去上清液。再
加 10 mL 生理鹽水（4.1），混勻。吸 1 mL 該菌懸液于 10 mL 生理鹽水（4.1）中，混勻制成測試菌液。

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6.1.5 以生理鹽水（4.1）做對照，在分光光度計 550 nm 波長下，測測試菌液（6.1.4）的光密度值，
此值應(yīng)在 60 %～80 %之間。
6.2 試樣的處理
稱取 2 g（精確至 0.0001 g）固態(tài)試樣或 5 g（精確至 0.0001 g）液態(tài)試樣（約含泛酸 0.1 mg）于 250
mL 三角燒杯中。加入 10 mL Tris 緩沖液（4.8），再加入少量水， 121 ℃ 水解 15 min，冷卻。用鹽酸（4.9）
調(diào) pH 至 4.5 ± 0.2，轉(zhuǎn)入 250 mL 容量瓶中用水定容。 過濾，吸 4 mL 濾液，稀釋至泛酸的濃度約為 5 ng/mL。
6.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
按表 1 順序加入蒸餾水、 標(biāo)準(zhǔn)溶液和培養(yǎng)基于試管中， 表 1 中每一編號需制作 3 管。 試管 S2 至 S10
中，相當(dāng)泛酸含量為 0 ng、 5 ng、 10 ng、 15 ng 、 20 ng 、 25 ng、 30 ng、 40 ng、 50 ng。
表 1 標(biāo)準(zhǔn)曲線管制作

試管號	S1	S2	S3	S4	S5	S6	S7	S8	S9	S10
蒸餾水（mL）	5	5	4	3	2	1	0	2	1	0
標(biāo)準(zhǔn)溶液（mL）	0	0	1	2	3	4	5	3	4	5
培養(yǎng)基（mL）	5	5	5	5	5	5	5	5	5	5
注 1： 試管 S3～S7 中加低濃度的為標(biāo)準(zhǔn)溶液。 注 2： 試管 S8～S10 中加高濃度的為標(biāo)準(zhǔn)溶液。

6.4 試樣管的制作
按表 2 順序加入蒸餾水、試樣和培養(yǎng)基于試管中，一式三份。
表 2 試樣管的制作

試管號	1	2	3	4
蒸餾水（mL）	4	3	2	1
試 樣（mL）	1	2	3	4
培養(yǎng)基（mL）	5	5	5	5

6.5 滅菌
將標(biāo)準(zhǔn)曲線管和試樣管 121 ℃ 滅菌 5 min，迅速冷卻到室溫（商品化培養(yǎng)基按標(biāo)簽說明進行滅菌)。
注： 保證加熱和冷卻過程中條件均勻，滅菌管數(shù)過多或距離太近，在滅菌鍋中都可產(chǎn)生不良影響。
6.6 接種
在無菌條件下每管中均加入一滴（約 50 μL）測試菌液（6.1.4），加蓋，充分振蕩混勻所有試管（標(biāo)
準(zhǔn)曲線未接種空白管 S1 除外）。
6.7 培養(yǎng)
36 ℃ ± 0.5 ℃ 培養(yǎng) 16 h～24 h。對每個試管進行目測檢查，未接種管中培養(yǎng)液應(yīng)是澄清的，標(biāo)準(zhǔn)曲
線管和試樣管中培養(yǎng)液的濁度應(yīng)有梯度。未接種管中若出現(xiàn)混濁，則測定無效。
6.8 測定

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以接種空白管（表 1 中試管號 S2）做對照，取出最高濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線管 S7，振蕩 5 s，在波長 550 nm
條件下讀取光密度值，放回重新培養(yǎng)。 2 h 后同等條件重新測該管的光密度，如果兩次光密度的絕對差
結(jié)果≤2 %，則取出全部檢驗管測定標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣的光密度。
6.9 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
以標(biāo)準(zhǔn)曲線管泛酸含量作橫坐標(biāo)，以光密度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
6.10 試樣管中泛酸含量的計算
按照 6.8 每個試樣管測定的光密度值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得對應(yīng)的泛酸含量。每一編號的三個試樣管
應(yīng)計算管中每毫升測定液泛酸的含量，并與三者平均值相比較。相對偏差小于 15 %的試管為有效試管，
無效試樣管應(yīng)舍去。有效試樣管總數(shù)應(yīng)大于所有試樣管總數(shù)的 2/3。重新計算每一編號的有效試樣管中
每毫升測定液泛酸含量的平均值，以此平均值計算全部編號試樣管的總平均值 Cx。
注： 樣品管中泛酸含量低于 5 ng，高于 50 ng 的值應(yīng)舍去。
7 分析結(jié)果的表述
試樣中泛酸含量按式（1）計算：
X= 100
1000
× ×
f
Cxm
…………………………………………………………………（1）
式中：
X——試樣中泛酸含量，單位為微克每百克（μg/100 g）；
Cx——6.10 中計算所得的總平均值，單位為微克（μg）；
f——稀釋倍數(shù)；
m——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。
以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。
8 精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10 %。
第二法 高效液相色譜法
9 原理
試樣經(jīng)熱水提取等前處理后，經(jīng) C18 色譜柱分離，紫外檢測器檢測，外標(biāo)法定量泛酸的含量。
10 試劑和材料
除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。
10.1 淀粉酶：酶活力≥1.5 U/mg。
10.2 甲醇(CH4O)：色譜純。
10.3 鹽酸。
10.4 硫酸鋅(ZnSO4)。

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10.5 鹽酸（0.1 mol/L）：移取 8.3 mL 鹽酸（10.3）于 1000 mL 容量瓶中，用水定容。
10.6 硫酸鋅溶液（15 g/100mL）：稱取 15 g 硫酸鋅（10.4）用水溶解并定容至 100 mL。
10.7 磷酸二氫鉀溶液（0.05 mol/L）：稱取 6.8 g 磷酸二氫鉀，用水溶解并定容至 1000 mL。用磷酸調(diào)
節(jié) pH 至 3.0，用 0.45 μm 濾膜過濾。
10.8 泛酸標(biāo)準(zhǔn)溶液
10.8.1 泛酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1 mg/mL）：準(zhǔn)確稱取泛酸鈣 1.087 g，加水溶解并定容至 1000 mL。
泛酸濃度=泛酸鈣濃度×0.920
10.8.2 泛酸標(biāo)準(zhǔn)中間液（0.1 mg/mL）：吸取標(biāo)準(zhǔn)儲備液（10.8.1） 10 mL 于 100 mL 容量瓶中，加水
定容。臨用前配制。
11 儀器和設(shè)備
11.1 天平：感量為 0.1 mg。
11.2 高效液相色譜儀，帶紫外檢測器。
11.3 超聲波。
11.4 pH 計：精度為 0.01。
11.5 培養(yǎng)箱： 55 ℃ ± 2 ℃ 。
12 分析步驟
12.1 試樣處理
12.1.1 不含淀粉類試樣處理
稱取混合均勻的固態(tài)試樣約5 g（精確至0.0001 g）或液態(tài)試樣約20 g（精確至0.0001 g）于150 mL
三角瓶中，固體試樣加入約30 mL 40 ℃ ～50 ℃ 溫水，振搖溶解后超聲萃取20 min。
12.1.2 含淀粉類試樣處理
如果試樣中含有淀粉，稱取混合均勻的固態(tài)試樣約5 g（精確到0.0001 g）或液態(tài)試樣約20 g（精確
到0.0001 g）于150mL三角瓶中，加入淀粉酶（10.1）約0.2 g, 固體試樣加入約30 mL 40 ℃ ～50 ℃ 溫水
振搖溶解，蓋上瓶塞，在50 ℃ ～60 ℃ 條件下酶解30 min。
12.2 測定液的制備
試樣溶液降至室溫后，用鹽酸（10.5）調(diào)節(jié) pH 至 4.5 ± 0.1，加入 5 mL 硫酸鋅溶液（10.6），充分
混合。轉(zhuǎn)入 50 mL 容量瓶中，用水定容至刻度并充分混勻后，用濾紙過濾。濾液經(jīng) 0.45 μm 濾膜過濾后，
即為試樣待測液。
12.3 參考色譜條件
色譜柱： ODS-C18（粒徑 5 μm， 250 mm×4.6 mm ）或具有同等性能的色譜柱。
流動相：取磷酸二氫鉀溶液（10.7） 900 mL，取甲醇（10.2） 100 mL，混勻后經(jīng)0.45 μm微孔濾膜
加壓過濾。
流速： 1.0 mL/min。
檢測波長： 200 nm。

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柱溫： 30 ℃ ± 1 ℃ 。
進樣量： 10 μL。
12.4 測定
12.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線測定
分別準(zhǔn)確吸取泛酸標(biāo)準(zhǔn)中間液（10.8.2） 1.0 mL， 2.0 mL， 4.0 mL， 8.0 mL， 12.0 mL于100 mL容量
瓶中，加水定容至刻度，得到濃度分別為1.0 μg/mL， 2.0 μg/mL， 4.0 μg/mL， 8.0 μg/mL， 12.0 μg/mL的
泛酸標(biāo)準(zhǔn)工作液，臨用前配制。
將上述泛酸標(biāo)準(zhǔn)工作依次進行色譜測定（其標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖見附錄A中圖A.1），記錄色譜峰高（或
峰面積）。以峰高（或峰面積）為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
12.4.2 試樣溶液的測定
吸取試樣待測液（12.2） 10 μL，將試樣待測液進行色譜測定，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得試液中泛酸的濃
度。
13 分析結(jié)果的表述
試樣中泛酸的含量按式（2）計算：
= × × ×100
m
V C K
X …………………………………………………………………(2)
式中：
X——試樣中泛酸含量，單位為微克每百克（μg/100 g）
C——試樣溶液中泛酸的質(zhì)量濃度，單位為微克毫升（μg/mL）；
m ——稱取試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；
V——被測樣液總體積，單位為毫升（mL）；
K——樣液稀釋倍數(shù)。
以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。
14 精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10 %。
15 其他
本標(biāo)準(zhǔn)第二法檢出限為 100 μg/100 g。

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附錄 A
（資料性附錄）
泛酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖
A.1 泛酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖
泛酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖見圖 A.1。
圖 A.1 泛酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜