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山東拓普生物工程有限公司

Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd

 

紅細(xì)胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer,或稱 ACK Lysis Buffer)是一種去除紅細(xì)胞最簡(jiǎn)便易行的方法，即用裂解液裂解紅細(xì)胞，它既不損傷有核細(xì)胞又能充分的去除紅細(xì)胞。裂解液裂解是一種比較溫和的紅細(xì)胞去除方法，主要用于經(jīng)酶消化分散的組織細(xì)胞的分離純化，淋巴細(xì)胞的分離純化以及組織細(xì)胞蛋白與核酸提取等實(shí)驗(yàn)中紅細(xì)胞的去除。經(jīng)紅細(xì)胞裂解液裂解得到的組織細(xì)胞中不含紅細(xì)胞，可進(jìn)一步用于原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、流式細(xì)胞分析、核酸與蛋白的分離和提取等。

定義

紅細(xì)胞裂解液是一種去除紅細(xì)胞最簡(jiǎn)便易行的方法，即用裂解液裂解紅細(xì)胞，它既不損傷有核細(xì)胞又能充分的去除紅細(xì)胞。裂解液裂解是一種比較溫和的紅細(xì)胞去除方法,主要用于經(jīng)酶消化分散的組織細(xì)胞的分離純化，淋巴細(xì)胞的分離純化以及組織細(xì)胞蛋白與核酸提取等實(shí)驗(yàn)中紅細(xì)胞的去除。經(jīng)紅細(xì)胞裂解液裂解得到的組織細(xì)胞中不含紅細(xì)胞，可進(jìn)一步用于原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、流式細(xì)胞分析、核酸與蛋白的分離和提取等。

保存條件

2-8℃保存。

使用說(shuō)明

組織細(xì)胞樣品：

1.新鮮組織經(jīng)胰酶或膠原酶等消化分散成單個(gè)細(xì)胞懸液，離心棄去上清液。

2.從4℃冰箱中取出ELS裂解液，按1:3-5的比例向細(xì)胞沉淀中加入ELS裂解液（1ml細(xì)胞壓積加入3-5ml裂解液），輕輕吹打混勻；

3.800-1000rpm離心5-8分鐘，離心棄去上層紅色清液；

4.收集沉淀部分，加入Hank’s液或無(wú)血清培養(yǎng)液離心洗2-3次；

5.如裂解不完全可重復(fù)步驟2和3；

6.重懸細(xì)胞，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如提取RNA，最好是于步驟4開(kāi)始使用DEPC水配制的溶液中進(jìn)行。

血細(xì)胞

1.新鮮抗凝血，離心棄去上清液；

2.取出4℃冰箱預(yù)冷的ELS裂解液，按1:6-10的比例向細(xì)胞沉淀中加入ELS裂解液（1ml細(xì)胞壓積加入6-10ml裂解液），輕輕吹打混勻；

3.800-1000rpm離心5-8分鐘，離心棄去上層紅色清液；

4.收集沉淀部分，加入Hank’s液或無(wú)血清培養(yǎng)液離心洗2-3次；

5.如裂解不完全可重復(fù)步驟2和3；

6.重懸細(xì)胞，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如提取RNA，最好是于步驟4開(kāi)始使用DEPC水配制的溶液進(jìn)行。

作用原理

細(xì)胞裂解液一般都用得是含酶的,在血紅細(xì)胞表面上有紅細(xì)胞專署的表面抗原,當(dāng)裂解液中含可以攻擊特定紅細(xì)胞表面抗原的酶的時(shí)候 就只會(huì)造成紅細(xì)胞的變形,生物通道擴(kuò)大,膨脹,裂解,或者引起紅細(xì)胞的變性.而不會(huì)攻擊其他細(xì)胞.另外紅細(xì)胞有自己的電負(fù)性,滲透脆性(通常是一些非酶細(xì)胞裂解液的突破點(diǎn)) ,懸浮穩(wěn)定性,這都是區(qū)別于其他種類細(xì)胞的區(qū)別點(diǎn).紅細(xì)胞裂解液就是利用這些特性裂解紅細(xì)胞的.另外紅細(xì)胞裂解液不能達(dá)到100% 準(zhǔn)確的裂解紅細(xì)胞,總會(huì)或多或少導(dǎo)致其他種類細(xì)胞的裂解.