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中華人民共和國國家標準
GB 4789.5—2012
食品安全國家標準
食品微生物學檢驗 志賀氏菌檢驗
中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部
發(fā)布
2012-05-17 發(fā)布  2012-07-17 實施
GB 4789.5-2012
I
前 言
本標準代替GB/T 4789.5-2003《食品衛(wèi)生微生物學檢驗 志賀氏菌檢驗》。
本標準與GB/T 4789.5-2003 相比，主要變化如下：
——修改了標準名稱；
——修改了培養(yǎng)基和試劑；
——修改了操作步驟中增菌部分和生化試驗及附加生化試驗部分；
——修改了表2；
——修改了表4。
GB 4789.5-2012
2
食品安全國家標準
食品微生物學檢驗 志賀氏菌檢驗
1 范圍
本標準規(guī)定了食品中志賀氏菌(Shigella)的檢驗方法。
本標準適用于食品中志賀氏菌的檢驗。
2 設備和材料
除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設備外，其他設備和材料如下：
a） 恒溫培養(yǎng)箱：36 ℃±1 ℃；
b） 冰箱：2 ℃～5 ℃；
c） 膜過濾系統(tǒng)；
d） 厭氧培養(yǎng)裝置：41.5 ℃1 ℃；
e） 電子天平：感量 0.1 g；
f） 顯微鏡：10×～100×；
g） 均質(zhì)器；
h） 振蕩器；
i） 無菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸頭；
j） 無菌均質(zhì)杯或無菌均質(zhì)袋：容量 500 mL；
k） 無菌培養(yǎng)皿：直徑 90 mm；
l） pH 計或 pH 比色管或精密 pH 試紙；
m） 全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)。
3 培養(yǎng)基和試劑
3.1 志賀氏菌增菌肉湯-新生霉素：見附錄 A 中 A.1。
3.2 麥康凱（MAC）瓊脂：見附錄 A 中 A.2。
3.3 木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽（XLD）瓊脂：見附錄 A 中 A.3。
3.4 志賀氏菌顯色培養(yǎng)基。
3.5 三糖鐵（TSI）瓊脂：見附錄 A 中 A.4。
3.6 營養(yǎng)瓊脂斜面：見附錄 A 中 A.5。
3.7 半固體瓊脂：見附錄 A 中 A.6。
3.8 葡萄糖銨培養(yǎng)基：見附錄 A 中 A.7。
3.9 尿素瓊脂：見附錄 A 中 A.8。
GB 4789.5-2012
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3.10 β-半乳糖苷酶培養(yǎng)基：見附錄 A 中 A.9。
3.11 氨基酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基：見附錄 A 中 A.10。
3.12 糖發(fā)酵管：見附錄 A 中 A.11。
3.13 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基：見附錄 A 中 A.12。
3.14 粘液酸鹽培養(yǎng)基：見附錄 A 中 A. 13。
3.15 蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑：見附錄 A 中 A.14。
3.16 志賀氏菌屬診斷血清。
3.17 生化鑒定試劑盒。
4 檢驗程序
志賀氏菌檢驗程序見圖 1。
GB 4789.5-2012
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圖 1 志賀氏菌檢驗程序
5 操作步驟
5.1 增菌
以無菌操作取檢樣 25 g（mL），加入裝有滅菌 225 mL 志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)杯，用旋轉(zhuǎn)刀片式均
質(zhì)器以 8 000 r/min～10 000 r/min 均質(zhì)；或加入裝有 225 mL 志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)
器連續(xù)均質(zhì) 1 min～2 min，液體樣品振蕩混勻即可。于 41.5 ℃±１℃，厭氧培養(yǎng) 16 h～20 h。
5.2 分離
取增菌后的志賀氏增菌液分別劃線接種于XLD瓊脂平板和MAC瓊脂平板或志賀氏菌顯色培養(yǎng)基平板
上，于 36 ℃1 ℃培養(yǎng) 20 h～24 h，觀察各個平板上生長的菌落形態(tài)。宋內(nèi)氏志賀氏菌的單個菌落直徑大
于其他志賀氏菌。若出現(xiàn)的菌落不典型或菌落較小不易觀察，則繼續(xù)培養(yǎng)至 48 h 再進行觀察。志賀氏菌在
不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征見表 1。
36  ℃±１℃ ，20 h～48 h
XLD
挑取可疑菌落
TSI，半固體，
營養(yǎng)瓊脂斜面
MAC 或志賀氏菌顯色培養(yǎng)基
生化鑒定
報告
血清學分型
志賀氏菌屬分群及分型結果
檢樣
25 g（或 25 mL）樣品+志賀氏菌增菌肉湯 225 mL
41.5 ℃±１℃，
16 h～20 h 厭氧培養(yǎng)
GB 4789.5-2012
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表 1 志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征
選擇性瓊脂平板  志賀氏菌的菌落特征
MAC 瓊脂  無色至淺粉紅色，半透明、光滑、濕潤、圓形、邊緣整齊或不齊
XLD 瓊脂  粉紅色至無色，半透明、光滑、濕潤、圓形、邊緣整齊或不齊
志賀氏菌顯色培養(yǎng)基  按照顯色培養(yǎng)基的說明進行判定
5.3 初步生化試驗
5.3.1 自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個以上典型或可疑菌落，分別接種TSI、半固體和營養(yǎng)瓊脂斜面各一
管，置36 ℃1 ℃培養(yǎng)20 h～24 h，分別觀察結果。
5.3.2 凡是三糖鐵瓊脂中斜面產(chǎn)堿、底層產(chǎn)酸（發(fā)酵葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，蔗糖）、不產(chǎn)氣（福氏志賀氏
菌6型可產(chǎn)生少量氣體）、不產(chǎn)硫化氫、半固體管中無動力的菌株，挑取其5.3.1中已培養(yǎng)的營養(yǎng)瓊脂斜面
上生長的菌苔，進行生化試驗和血清學分型。
5.4 生化試驗及附加生化試驗
5.4.1 生化試驗
用 5.3.1 中已培養(yǎng)的營養(yǎng)瓊脂斜面上生長的菌苔，進行生化試驗，即 β-半乳糖苷酶、尿素、賴氨酸脫
羧酶、鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉苷的分解試驗。除宋內(nèi)氏志賀氏菌、鮑氏志賀氏菌 13 型的鳥氨酸
陽性;宋內(nèi)氏菌和痢疾志賀氏菌 1 型，鮑氏志賀氏菌 13 型的 β-半乳糖苷酶為陽性以外，其余生化試驗志賀
氏菌屬的培養(yǎng)物均為陰性結果。另外由于福氏志賀氏菌 6 型的生化特性和痢疾志賀氏菌或鮑氏志賀氏菌相
似，必要時還需加做靛基質(zhì)、甘露醇、棉子糖、甘油試驗，也可做革蘭氏染色檢查和氧化酶試驗，應為氧
化酶陰性的革蘭氏陰性桿菌。生化反應不符合的菌株，即使能與某種志賀氏菌分型血清發(fā)生凝集，仍不得
判定為志賀氏菌屬。志賀氏菌屬生化特性見表 2。
表 2 志賀氏菌屬四個群的生化特征
生化反應  A 群：痢疾志賀氏菌  B 群：福氏志賀氏菌  C 群：鮑氏志賀氏菌  D 群：宋內(nèi)氏志賀氏菌
ß-半乳糖苷酶  － a －  － a ＋
尿素  －  －  －  －
賴氨酸脫羧酶  －  －  －  －
鳥氨酸脫羧酶  －  －  － b ＋
水楊苷  －  －  －  －
七葉苷  －  －  －  －
靛基質(zhì)  －/＋  (＋)  －/＋  －
甘露醇  －  ＋ c ＋  ＋
棉子糖  －  ＋  －  ＋
甘油  (＋)  －  (＋)  d
注：+表示陽性；-表示陰性；-/+表示多數(shù)陰性；+/-表示多數(shù)陽性；（+）表示遲緩陽性；d 表示有不同生化型。
a 痢疾志賀 1 型和鮑氏 13 型為陽性。
b 鮑氏 13 型為鳥氨酸陽性。
c 福氏 4 型和 6 型常見甘露醇陰性變種。
5.4.2 附加生化實驗
由于某些不活潑的大腸埃希氏菌（anaerogenic E.coli）、A-D（Alkalescens-D isparbiotypes 堿性-異型）
菌的部分生化特征與志賀氏菌相似，并能與某種志賀氏菌分型血清發(fā)生凝集；因此前面生化實驗符合志賀
氏菌屬生化特性的培養(yǎng)物還需另加葡萄糖胺、西蒙氏檸檬酸鹽、粘液酸鹽試驗(36 ℃培養(yǎng) 24 h～48 h)。志
賀氏菌屬和不活潑大腸埃希氏菌、A-D 菌的生化特性區(qū)別見表 3。
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表 3 志賀氏菌屬和不活潑大腸埃希氏菌、A-D 菌的生化特性區(qū)別
生化反應
A 群：痢疾
志賀氏菌
B 群：福氏
志賀氏菌
C 群：鮑氏
志賀氏菌
D 群：宋內(nèi)氏
志賀氏菌
大腸埃希氏菌  A-D 菌
葡萄糖銨  － － － － ＋ ＋
西蒙氏檸檬酸鹽  － － － － d d
粘液酸鹽  － － － d ＋ d
注 1：+表示陽性；-表示陰性；d 表示有不同生化型。
注 2：在葡萄糖銨、西蒙氏檸檬酸鹽、粘液酸鹽試驗三項反應中志賀氏菌一般為陰性，而不活潑的大腸埃希氏菌、A-D（堿
性-異型）菌至少有一項反應為陽性。
5.4.3 如選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)，可根據(jù)5.3.2的初步判斷結果，用5.3.1中已培
養(yǎng)的營養(yǎng)瓊脂斜面上生長的菌苔，使用生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)進行鑒定。
5.5 血清學鑒定
5.5.1抗原的準備
志賀氏菌屬沒有動力，所以沒有鞭毛抗原。志賀氏菌屬主要有菌體（O）抗原。菌體 O 抗原又可分為
型和群的特異性抗原。
一般采用 1.2%～1.5%瓊脂培養(yǎng)物作為玻片凝集試驗用的抗原。
注 1：一些志賀氏菌如果因為 K 抗原的存在而不出現(xiàn)凝集反應時，可挑取菌苔于 1 mL 生理鹽水做成濃菌液，100 ℃煮
沸 15 min～60 min 去除 K 抗原后再檢查。
注 2：D 群志賀氏菌既可能是光滑型菌株也可能是粗糙型菌株，與其他志賀氏菌群抗原不存在交叉反應。與腸桿菌科不
同，宋內(nèi)氏志賀氏菌粗糙型菌株不一定會自凝。宋內(nèi)氏志賀氏菌沒有 K 抗原。
5.5.2 凝集反應
在玻片上劃出 2 個約 1cm×2cm 的區(qū)域，挑取一環(huán)待測菌，各放 1/2 環(huán)于玻片上的每一區(qū)域上部，在其
中一個區(qū)域下部加 1 滴抗血清，在另一區(qū)域下部加入 1 滴生理鹽水，作為對照。再用無菌的接種環(huán)或針分
別將兩個區(qū)域內(nèi)的菌落研成乳狀液。將玻片傾斜搖動混合 1 min，并對著黑色背景進行觀察，如果抗血清
中出現(xiàn)凝結成塊的顆粒，而且生理鹽水中沒有發(fā)生自凝現(xiàn)象，那么凝集反應為陽性。如果生理鹽水中出現(xiàn)
凝集，視作為自凝。這時，應挑取同一培養(yǎng)基上的其他菌落繼續(xù)進行試驗。
如果待測菌的生化特征符合志賀氏菌屬生化特征，而其血清學試驗為陰性的話，則按 5.5.1 注 1 進行
試驗。
5.5.3 血清學分型（選做項目）
先用四種志賀氏菌多價血清檢查，如果呈現(xiàn)凝集，則再用相應各群多價血清分別試驗。先用 B 群福氏
志賀氏菌多價血清進行實驗，如呈現(xiàn)凝集，再用其群和型因子血清分別檢查。如果 B 群多價血清不凝集，
則用 D 群宋內(nèi)氏志賀氏菌血清進行實驗，如呈現(xiàn)凝集，則用其Ⅰ相和Ⅱ相血清檢查；如果 B、D 群多價血
清都不凝集，則用 A 群痢疾志賀氏菌多價血清及 1～12 各型因子血清檢查，如果上述三種多價血清都不凝
集，可用 C 群鮑氏志賀氏菌多價檢查，并進一步用 1～18 各型因子血清檢查。福氏志賀氏菌各型和亞型的
型抗原和群抗原鑒別見表 4。
表 4 福氏志賀氏菌各型和亞型的型抗原和群抗原的鑒別表
型和亞型  型抗原  群抗原
在群因子血清中的凝集
3,4  6  7,8
1a  Ⅰ  4  +  -  -
1b  Ⅰ  （4），6  (+)  +  -
2a  Ⅱ  3,4  +  -  -
2b  Ⅱ  7,8  -  -  +
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表 4（續(xù)） 福氏志賀氏菌各型和亞型的型抗原和群抗原的鑒別表
型和亞型  型抗原  群抗原
在群因子血清中的凝集
3,4  6  7,8
3a  Ⅲ  （3，4）,6,7,8  (+)  +  +
3b  Ⅲ  （3,4）,6  (+)  +  -
4a  Ⅳ  3,4  +  -  -
4b  Ⅳ  6  -  +  -
4c  Ⅳ  7,8  -  -  +
5a  Ⅴ  （3,4）  (+)  -  -
5b  Ⅴ  7,8  -  -  +
6  Ⅵ  4  +  -  -
X  -  7,8  -  -  +
Y  -  3,4  +  -  -
注：+表示凝集；-表示不凝集；（）表示有或無。
5.6 結果報告
綜合以上生化試驗和血清學鑒定的結果，報告 25 g（mL）樣品中檢出或未檢出志賀氏菌。
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附錄A
培養(yǎng)基和試劑
A.1 志賀氏菌增菌肉湯-新生霉素（ Shigella  broth）
A.1.1 志賀氏菌增菌肉湯
A.1.1.1 成分
胰蛋白胨  20.0 g
葡萄糖 1.0 g
磷酸氫二鉀  2.0 g
磷酸二氫鉀  2.0 g
氯化鈉  5.0 g
吐溫 80（Tween 80）  1.5 mL
蒸餾水  1 000.0 mL
A.1.1.2 制法
將以上成分混合加熱溶解，冷卻至25 ℃左右校正pH至7.00.2，分裝適當?shù)娜萜鳎?21 ℃滅菌15 min。
取出后冷卻至 50 ℃~55 ℃，加入除菌過濾的新生霉素溶液（0.5 μg/mL），分裝 225 mL 備用。
注：如不立即使用，在 2 ℃~8 ℃條件下可儲存一個月。
A.1.2 新生霉素溶液
A.1.2.1 成分
新生霉素 25.0 mg
蒸餾水  1 000.0 mL
A.1.2.2 制法
將新生霉素溶解于蒸餾水中，用 0.22 μm 過濾膜除菌，如不立即使用，在 2 ℃~8 ℃條件下可儲存一
個月。
A.1.3 臨用時每 225 mL 志賀氏菌增菌肉湯（A.1.1）加入 5 mL 新生霉素溶液（A.1.2），混勻。
A.2 麥康凱（MAC）瓊脂
A.2.1 成分
蛋白胨  20.0 g
乳糖  10.0 g
3 號膽鹽 1.5 g
氯化鈉  5.0 g
中性紅  0.03 g
結晶紫  0.001 g
瓊脂  15.0 g
蒸餾水  1 000.0 mL
A.2.2 制法
將以上成分混合加熱溶解，冷卻至 25 ℃左右校正 pH 至 7.2±0.2，分裝，121 ℃高壓滅菌 15 min。冷
卻至 45 ℃～50 ℃，傾注平板。
注：如不立即使用，在 2 ℃~8 ℃條件下可儲存二周。
A.3 木糖賴氨酸脫氧膽鹽（XLD）瓊脂
A.3.1 成分
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酵母膏  3 .0 g
L-賴氨酸  5.0 g
木糖  3.75 g
乳糖  7.5 g
蔗糖  7.5 g
脫氧膽酸鈉 1.0 g
氯化鈉  5.0 g
硫代硫酸鈉 6.8 g
檸檬酸鐵銨 0.8 g
酚紅 0.08 g
瓊脂  15.0 g
蒸餾水  1 000.0 mL
A.3.2 制法
除酚紅和瓊脂外，將其他成分加入 400 mL 蒸餾水中，煮沸溶解，校正 pH 至 7.40.2。另將瓊脂加
入 600 mL 蒸餾水中，煮沸溶解。
將上述兩溶液混合均勻后，再加入指示劑，待冷至 50 ℃~55 ℃傾注平皿。
注：本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌，在制備過程中不宜過分加熱，避免降低其選擇性，貯于室溫暗處。本培養(yǎng)基宜于當天
制備，第二天使用。使用前必須去除平板表面上的水珠，在 37 ℃～55 ℃溫度下，瓊脂面向下、平板蓋亦向下烘干。另外
如配制好的培養(yǎng)基不立即使用，在 2 ℃~8 ℃條件下可儲存二周。
A.4 三糖鐵（TSI）瓊脂
A.4.1 成分
蛋白胨  20.0 g
牛肉浸膏  5.0 g
乳糖  10.0 g
蔗糖  10.0 g
葡萄糖  1.0 g
硫酸亞鐵銨 (NH 4 ) 2 Fe(SO 4 ) 2 ·6H 2 O 0.2 g
氯化鈉 5.0 g
硫代硫酸鈉 0.2 g
酚紅  0.025 g
瓊脂  12.0 g
蒸餾水  1 000.0 mL
A.4.2 制法
除酚紅和瓊脂外，將其他成分加于 400 mL 蒸餾水中,攪拌均勻,靜置約 10 min,加熱使完全溶化, 冷卻
至 25 ℃左右校正 pH 至 7.40.2。另將瓊脂加于 600 mL 蒸餾水中，靜置約 10 min，加熱使完全溶化。將
兩溶液混合均勻，加入 5%酚紅水溶液 5 mL，混勻，分裝小號試管，每管約 3 mL。于 121 ℃滅菌 15 min，
制成高層斜面。冷卻后呈桔紅色。如不立即使用，在 2 ℃~8 ℃條件下可儲存一個月。
A.5 營養(yǎng)瓊脂斜面
A.5.1 成分
蛋白胨  10.0 g
牛肉膏  3.0 g
氯化鈉  5.0 g
瓊脂  15.0 g
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蒸餾水  1 000.0 mL
A.5.2 制法
將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內(nèi)，加入 15%氫氧化鈉溶液約 2 mL，冷卻至 25 ℃左右校正 pH
至 7.00.2。加入瓊脂，加熱煮沸，使瓊脂溶化。分裝小號試管，每管約 3 mL。于 121 ℃滅菌 15 min，
制成斜面。
注：如不立即使用，在 2℃ ~8 ℃條件下可儲存二周。
A.6 半固體瓊脂
A.6.1 成分
蛋白胨  1 . 0 g
牛肉膏  0.3 g
氯化鈉  0.5 g
瓊脂  0.3g～0.7g
蒸餾水  100.0 mL
A.6.2 制法
按以上成分配好，加熱溶解，并校正pH至 7.40.2，分裝小試管，121 ℃滅菌 15 min，直立凝固備
用。
A.7 葡萄糖銨培養(yǎng)基
A.7.1 成分
氯化鈉  5.0 g
硫酸鎂（MgSO4·7H 2 O）  0.2 g
磷酸二氫銨  1.0 g
磷酸氫二鉀  1.0 g
葡萄糖  2.0 g
瓊脂  20.0 g
0.2%溴麝香草酚藍水溶液  40.0 mL
蒸餾水  1 000.0 mL
A.7.2 制法
先將鹽類和糖溶解于水內(nèi)，校正pH至6.80.2，再加瓊脂加熱溶解，然后加入指示劑�；旌暇鶆蚝�
分裝試管，121 ℃高壓滅菌15 min。制成斜面?zhèn)溆谩?br /> A.7.3 試驗方法
用接種針輕輕觸及培養(yǎng)物的表面，在鹽水管內(nèi)做成極稀的懸液，肉眼觀察不到混濁，以每一接種環(huán)
內(nèi)含菌數(shù)在 20~100 之間為宜。將接種環(huán)滅菌后挑取菌液接種，同時再以同法接種普通斜面一支作為對
照。于 36 ℃1 ℃培養(yǎng) 24 h。陽性者葡萄糖銨斜面上有正常大小的菌落生長；陰性者不生長，但在對照
培養(yǎng)基上生長良好。如在葡萄糖銨斜面生長極微小的菌落可視為陰性結果。
注：容器使用前應用清潔液浸泡。再用清水、蒸餾水沖洗干凈，并用新棉花做成棉塞，干熱滅菌后使用。如果操作時
不注意，有雜質(zhì)污染時，易造成假陽性的結果。
A.8 尿素瓊脂
A.8.1 成分
蛋白胨  1 . 0 g
氯化鈉  5.0 g
葡萄糖  1.0 g
磷酸二氫鉀  2.0 g
0.4%酚紅溶液 3 .0mL
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瓊脂  20.0 g
20%尿素溶液  100 .0mL
蒸餾水  900.0 mL
A.8.2 制法
除酚紅和尿素外的其他成分加熱溶解，冷卻至25 ℃左右校正pH至7.20.2，加入酚紅指示劑，混勻，
于121 ℃滅菌15 min。冷至約55 ℃，加入用0.22 μm過濾膜除菌后的20%尿素水溶液100 mL，混勻，以
無菌操作分裝滅菌試管，每管約3 mL~4 mL，制成斜面后放冰箱備用。
A.8.3 試驗方法
挑取瓊脂培養(yǎng)物接種，在 36 ℃1 ℃培養(yǎng) 24 h，觀察結果。尿素酶陽性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)?br /> 紅色。
A.9 β-半乳糖苷酶培養(yǎng)基
A.9.1 液體法（ONPG法）
A.9.1.1 成分
鄰硝基苯 β-D-半乳糖苷(ONPG)  60.0 mg
0.01 mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.50.2)  10.0 mL
1%蛋白胨水(pH7.50.2)  30.0 mL
A.9.1.2 制法
將ONPG溶于緩沖液內(nèi)，加入蛋白胨水，以過濾法除菌，分裝于10 mm×75 mm試管內(nèi)，每管0.5 mL，
用橡皮塞塞緊。
A.9.1.3 試驗方法
自瓊脂斜面挑取培養(yǎng)物一滿環(huán)接種，于36 ℃1 ℃培養(yǎng)1 h~3 h和24 h觀察結果。如果β-D-半乳糖苷
酶產(chǎn)生，則于1 h~3 h變黃色，如無此酶則24 h不變色。
A.9.2 平板法（X-Gal法）
A.9.2.1 成分
蛋白胨  20.0 g
氯化鈉  3.0 g
5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-Gal)  200.0 mg
瓊脂  15.0 g
蒸餾水 1 000.0 mL
A.9.2.2 制法
將各成分（A.9.2.1）加熱煮沸于1 L水中，冷卻至25 ℃左右校正pH至7.20.2，115 ℃高壓滅菌10 min。
傾注平板避光冷藏備用。
A.9.2.3 試驗方法
挑取瓊脂斜面培養(yǎng)物接種于平板，劃線和點種均可，于36 ℃1 ℃培養(yǎng)18 h~24 h觀察結果。如果
β-D-半乳糖苷酶產(chǎn)生，則平板上培養(yǎng)物顏色變藍色，如無此酶則培養(yǎng)物為無色或不透明色，培養(yǎng)48 h~72
h后有部分轉(zhuǎn)為淡粉紅色。
A.10 氨基酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基
A.10.1 成分
蛋白胨  5.0 g
酵母浸膏  3.0 g
葡萄糖 1.0 g
1.6%溴甲酚紫-乙醇溶液 1.0 mL
L型或DL型賴氨酸和鳥氨酸  0.5 g/100 mL 或 1.0 g/100 mL
GB 4789.5-2012
12
蒸餾水 1 000.0 mL
A.10.2 制法
除氨基酸以外的成分加熱溶解后，分裝每瓶 100 mL，分別加入賴氨酸和鳥氨酸。L-氨基酸按 0.5%
加入，DL-氨基酸按 1%加入，再校正 pH 至 6.8±0.2。對照培養(yǎng)基不加氨基酸。分裝于滅菌的小試管內(nèi)，
每管 0.5 mL，上面滴加一層石蠟油，115 ℃高壓滅菌 10 min。
A.10.3 試驗方法
從瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物接種，于 36 ℃1 ℃培養(yǎng) 18 h～24 h，觀察結果。氨基酸脫羧酶陽性者由
于產(chǎn)堿，培養(yǎng)基應呈紫色。陰性者無堿性產(chǎn)物，但因葡萄糖產(chǎn)酸而使培養(yǎng)基變?yōu)辄S色。陰性對照管應為
黃色，空白對照管為紫色。
A.11 糖發(fā)酵管
A.11.1 成分
牛肉膏 5.0 g
蛋白胨  10.0 g
氯化鈉 3.0 g
磷酸氫二鈉（NA 2 HPO 4 ·12H 2 O）  2.0 g
0.2%溴麝香草酚藍溶液  12.0 mL
蒸餾水 1 000.0 mL
A.11.2 制法
A.11.2.1 葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后，按0.5%加入葡萄糖，25 ℃左右校正pH至7.4±0.2，分裝于有
一個倒置小管的小試管內(nèi)，121 ℃高壓滅菌15 min。
A.11.2.2 其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后,分裝每瓶100 mL，121 ℃高壓滅菌15 min。另將各種糖
類分別配好10%溶液，同時高壓滅菌。將5 mL糖溶液加入于100 mL培養(yǎng)基內(nèi)，以無菌操作分裝小試管。
注：蔗糖不純，加熱后會自行水解者，應采用過濾法除菌。
A.11.3 試驗方法
從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種，于36 ℃1 ℃培養(yǎng)，一般觀察2 d~3 d。遲緩反應需觀察14 d~30 d。
A.12 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基
A.12.1 成分
氯化鈉  5.0 g
硫酸鎂（MgSO4·7H 2 O）  0.2 g
磷酸二氫銨  1.0 g
磷酸氫二鉀  1.0 g
檸檬酸鈉  5.0 g
瓊脂  20 g
0.2%溴麝香草酚藍溶液  40.0 mL
蒸餾水  1 000.0 mL
A.12.2 制法
先將鹽類溶解于水內(nèi)，調(diào)至pH 6.80.2，加入瓊脂，加熱溶化。然后加入指示劑，混合均勻后分裝
試管，121℃滅菌15 min。制成斜面?zhèn)溆谩?br /> A.12.3 試驗方法
挑取少量瓊脂培養(yǎng)物接種，于36 ℃1 ℃培養(yǎng)4 d，每天觀察結果。陽性者斜面上有菌落生長，培養(yǎng)
基從綠色轉(zhuǎn)為藍色。
A.13 粘液酸鹽培養(yǎng)基
A.13.1 測試肉湯
GB 4789.5-2012
13
A.13.1.1 成分
酪蛋白胨 10.0 g
溴麝香草酚藍溶液 0.024 g
蒸餾水 1 000.0 mL
粘液酸 10.0 g
A.13.1.2 制法
慢慢加入5 N氫氧化鈉以溶解粘液酸，混勻。
其余成分加熱溶解，加入上述粘液酸，冷卻至25 ℃左右校正pH至7.4±0.2，分裝試管，每管約5
mL，于121 ℃高壓滅菌10 min。
A.13.2 質(zhì)控肉湯
A.13.2.1 成分
酪蛋白胨 10.0 g
溴麝香草酚藍溶液 0.024 g
蒸餾水 1 000.0 mL
A.13.2.2 制法
所有成分加熱溶解，冷卻至25 ℃左右校正pH至7.4±0.2，分裝試管，每管約5 mL，于121 ℃高壓滅菌
10 min。
A 13.3 試驗方法
將待測新鮮培養(yǎng)物接種測試肉湯（A.13.1）和質(zhì)控肉湯（A.13.2），于36 ℃1 ℃培養(yǎng)48 h觀察結果，
肉湯顏色藍色不變則為陰性結果，黃色或稻草黃色為陽性結果。
A.14 蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑
A.14.1成分
蛋白胨(或胰蛋白胨) 20.0 g
氯化鈉 5.0 g
蒸餾水 1 000.0 mL
pH7.4 
A.14.2 制法
按上述成分配制，分裝小試管，121 ℃高壓滅菌 15 min。
注：此試劑在 2 ℃~8 ℃條件下可儲存一個月。
A.14.3 靛基質(zhì)試劑
A.14.3.1 柯凡克試劑：將 5 g 對二甲氨基苯甲醛溶解于 75 mL 戊醇中。然后緩慢加入濃鹽酸 25 mL。
A.14.3.2 歐－波試劑：將 1 g 對二甲氨基苯甲醛溶解于 95 mL 95%乙醇內(nèi)。然后緩慢加入濃鹽酸 20 mL。
A.14.4 試驗方法
挑取少量培養(yǎng)物接種，在36 ℃±1 ℃培養(yǎng)1 d～2 d，必要時可培養(yǎng)4 d～5 d。加入柯凡克試劑約0.5 mL，
輕搖試管，陽性者于試劑層呈深紅色；或加入歐－波試劑約 0.5 mL，沿管壁流下，覆蓋于培養(yǎng)液表面，
陽性者于液面接觸處呈玫瑰紅色。
注：蛋白胨中應含有豐富的色氨酸。每批蛋白胨買來后，應先用已知菌種鑒定后方可使用，此試劑在 2 ℃～8 ℃條
件下可儲存一個月。