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如何使用牛津杯做抑菌試驗/藥敏實驗（杯碟法）

抑菌試驗/藥敏實驗方法主要有兩種，即擴(kuò)散法和稀釋法。其中擴(kuò)散法屬手工測試方法，通過測試藥物紙片或者牛津杯在固體培養(yǎng)基上的抑菌圈的大小，判斷細(xì)菌對該種藥物是否敏感。稀釋法包括試管稀釋法和微量稀釋法，通過測試細(xì)菌在含不同濃度藥物培養(yǎng)基內(nèi)的生長情況，判斷其最低抑菌濃度（MIC）。

由于擴(kuò)散法操作簡單，成本低，已經(jīng)被大多數(shù)實驗室和基層單位所采用。擴(kuò)散法又包括紙片法、牛津杯法和打孔法。

一、實驗原理

1、將培養(yǎng)基平板置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，一方面試驗菌（指示菌）開始生長繁殖；另一方面抗生素呈球面擴(kuò)散，形成遞減的梯度濃度，離杯越近，抗生素濃度越大，離杯越遠(yuǎn)抗生素濃度越小。

2、在牛津杯周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的細(xì)菌的生長被抑制，形成透明的抑菌圈。

3、抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度（藥敏實驗）或藥物對指示細(xì)菌的抑菌程度（抑菌試驗）。

4、抗生素濃度越高，抑菌圈越大。

5、在抑菌圈的邊緣處，瓊脂培養(yǎng)基中所含抑菌物質(zhì)的濃度即為該菌懸液中對該種指示菌的最低抑菌濃度（MIC） 。

6、抑菌圈直徑與藥物對測試菌的最低抑菌濃度 呈負(fù)相關(guān)，即抑菌圈愈大，MIC愈小。

二、實驗材料

培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基

菌種：大腸桿菌（E.coli)、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)

藥品：阿莫西林、黃芪多糖、

其他：牛津杯、培養(yǎng)皿、酒精棉、酒精燈、涂布器、移液槍、1mL、200uL槍頭、恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺、接種環(huán)

三、實驗操作

1. 倒平板：將已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基加熱到完全融化，倒在培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿約20ml，凝固。

2. 標(biāo)記：菌種、牛津杯擺放位置、藥物及其 濃度

3. 制備菌懸液：用生理鹽水洗下試管內(nèi)的菌苔并稀釋。

4. 菌液涂布：吸取1mL 菌液入平板表面，用涂布器涂布將菌液涂布均勻

5. 擺放牛津杯：在培養(yǎng)基表面垂直擺放牛津杯，輕輕加壓，使其與培養(yǎng)基接觸無空隙。

6.加入待檢藥液：在杯中加入不同稀釋度的藥液或待檢樣品。

7. 孵育：加滿后在37 ℃培養(yǎng)16~18 h。

8. 結(jié)果報告：用毫米尺量取抑菌圈直徑，參考表的標(biāo)準(zhǔn)判讀結(jié)果，按敏感（S）、中介（I）、耐藥（R）報

以牛津杯周圍沒有肉眼可見生長物區(qū)域為抑菌圈，根據(jù)抑菌圈直徑大小判斷細(xì)菌對抗菌藥的敏感性。

抑菌試驗結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈直徑（毫米）

＞20極敏感

15-20高敏感

10-14中敏感

＜10低敏感

 0不敏感

四、注意事項

1.         在超凈工作臺中或酒精燈旁操作

2.         平板倒好，一定要平

3.         牛津杯立直，才能保證杯內(nèi)抑菌物質(zhì)均勻的向四周擴(kuò)散

4.         牛津杯均勻擺放于培養(yǎng)基上，位置安排適中，防止出現(xiàn)抑制圈重疊，可在平皿中央擺一個，外周等距離擺5－6個。