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革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌是利用革蘭氏染色法來(lái)鑒別的兩大類細(xì)菌。大多數(shù)化膿性球菌都屬于革蘭氏陽(yáng)性菌,它們能產(chǎn)生外毒素使人致病,而大多數(shù)腸道菌多屬于革蘭氏陰性菌,它們產(chǎn)生內(nèi)毒素,靠?jī)?nèi)毒素使人致病。
簡(jiǎn)介
自然界存在多種多樣病菌,如何將這些病菌加以鑒別、分類,并選擇有效藥物進(jìn)行治療這是很重要的問(wèn)題。
1884年革蘭氏染色法被發(fā)明,用于細(xì)菌的形態(tài)觀察和分類,根據(jù)革蘭氏染色反應(yīng)的基本特征,細(xì)菌可以主要分為兩大類:G陽(yáng)性(G+)和G陰性(G-)。前者經(jīng)過(guò)染色后細(xì)菌細(xì)胞仍然保留初染結(jié)晶紫的藍(lán)紫色,后者經(jīng)過(guò)染色后細(xì)菌細(xì)胞則先脫去了初染結(jié)晶紫的顏色,帶上了復(fù)雜蕃紅或沙黃的紅色。
細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)
細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)包括細(xì)胞壁和原生質(zhì)體兩部分。原生質(zhì)體位于細(xì)胞壁內(nèi),包括細(xì)胞膜(細(xì)胞質(zhì)膜)、細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)和內(nèi)含物。另外細(xì)胞還含有有些特殊結(jié)構(gòu),主要有莢膜、芽孢、鞭毛和菌毛等4種。
1.細(xì)胞壁
革蘭氏染色的機(jī)理主要是抓住了革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌與陰性細(xì)菌在細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)與組成上的不同,具體比較見(jiàn)下表:
進(jìn)一步的,革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的細(xì)胞壁主要由肽聚糖和包括磷壁酸的酸性多糖構(gòu)成,細(xì)胞表面整體帶負(fù)電的部分原因就是因?yàn)榱妆谒釒ж?fù)電。同時(shí),磷壁酸賦予了革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌以特異的表面抗原。
總的說(shuō)來(lái),細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的差異導(dǎo)致了染料吸收的差異,也導(dǎo)致了很多生理特性的不同。
2.非細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)
性質(zhì)
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革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌
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革蘭氏陰性細(xì)菌
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內(nèi)壁層
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外壁層
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結(jié)構(gòu)
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厚度(nm)
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20~80
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2~3
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8
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層次
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單層
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多層
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肽聚糖關(guān)系
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多層,75%亞單位交聯(lián),網(wǎng)絡(luò)緊密堅(jiān)固
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單層,30%亞單位交聯(lián),網(wǎng)絡(luò)較疏松
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與細(xì)胞膜關(guān)系
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不緊密
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緊密
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組成
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肽聚糖
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占細(xì)胞干重的40%~90%
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5%~10%
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無(wú)
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磷聚(酸)酯
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有或無(wú)
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無(wú)
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無(wú)
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多糖
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有
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無(wú)
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無(wú)
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蛋白質(zhì)
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有或無(wú)
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無(wú)
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有
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脂多糖
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無(wú)
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有
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11%~22%
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在非細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)中,革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌和陰性細(xì)菌主要的區(qū)別在于是否有芽孢和鞭毛與性菌毛的不同上。
芽孢是某些細(xì)菌菌體發(fā)育過(guò)程中的一個(gè)階段,在一定的環(huán)境條件下由于細(xì)胞質(zhì)和核質(zhì)的濃縮凝集形成的一種特殊結(jié)構(gòu)。革蘭氏陰性細(xì)菌中沒(méi)有會(huì)形成芽孢的菌種,而部分革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌可以。
另外,在鞭毛和性菌毛方面兩者也有不同。鞭毛和性菌毛都是附屬物。某些細(xì)菌表面伸出的細(xì)長(zhǎng)、波曲的附屬物稱為鞭毛。(顧夏生,胡洪營(yíng),文湘華,王慧等.水處理生物學(xué).北京:中國(guó)建筑工業(yè)出版社.2010年.P16)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的鞭毛上基本著生兩個(gè)環(huán),革蘭氏陰性細(xì)菌則基本著生四個(gè)環(huán)。(趙開(kāi)弘.環(huán)境微生物學(xué).武漢:華中科技大學(xué).2009年.P30)性菌毛只見(jiàn)于革蘭氏陰性菌,參與細(xì)胞間稱作接合作用的交配過(guò)程。
生理特性
以下是關(guān)于革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌和陰性細(xì)菌在生理特性方面的比較。兩者的不同從本質(zhì)上來(lái)說(shuō),還是主要是由細(xì)胞結(jié)構(gòu)的不同所決定的。
項(xiàng)目
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革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌
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革蘭氏陰性細(xì)菌
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對(duì)機(jī)械力的抗性
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強(qiáng)
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弱
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細(xì)胞壁抗溶菌酶
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弱(敏感)
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強(qiáng)(不敏感)*
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對(duì)青霉素、磺胺
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敏感
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不敏感*
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對(duì)鏈霉素、氯霉素、四環(huán)素
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不敏感
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敏感
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對(duì)堿性染料的抑菌作用
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強(qiáng)
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弱*
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對(duì)陰離子去污劑
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敏感
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不敏感*
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對(duì)疊氮化鈉
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敏感
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不敏感
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對(duì)干燥
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抗性強(qiáng)
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抗性弱
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*細(xì)胞壁最外層的脂多糖阻礙溶菌酶、抗生素、染料、去污劑等較大分子進(jìn)入
常見(jiàn)的革蘭氏陽(yáng)性菌
常見(jiàn)的革蘭氏陽(yáng)性菌有:葡萄球菌(Staphylococcus)、鏈球菌(Streptococcus)、肺炎雙球菌、炭疽桿菌、白喉?xiàng)U菌、破傷風(fēng)桿菌等;常見(jiàn)的革蘭氏陰性菌有痢疾桿菌、傷寒桿菌、變形桿菌、及霍亂弧菌等。
在治療上,大多數(shù)革蘭氏陽(yáng)性菌都對(duì)青霉素敏感(結(jié)核桿菌對(duì)青霉素不敏感);而革蘭氏陰性菌則對(duì)青霉素不敏感(但奈瑟氏菌中的流行性腦膜炎雙球菌和淋病雙球菌對(duì)青霉素敏感),而對(duì)鏈霉素、氯霉素等敏感。所以首先區(qū)分病原菌是革蘭氏陽(yáng)性菌還是陰性菌,在選擇抗生素方面意義重大。
結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁較厚,約20~80nm。肽聚糖含量豐富,有15~50層,每層厚度1nm,約占細(xì)胞干重的50~80%。此外,尚有大量特殊組份磷壁酸(teichoic acid)。磷壁酸是由核糖醇(ribitol)或甘油(glycerol)殘基經(jīng)由磷酸二鍵互相連接而成的多聚物。磷壁酸分壁磷壁酸(wall teichoic acid)和膜磷壁酸(membrane teichoic acid)兩種,前者和細(xì)胞壁中肽聚糖的n-乙酰胞壁酸連結(jié),膜磷壁酸又稱脂磷壁酸(lipteichoic acid)和細(xì)胞膜連結(jié),另一端均游離于細(xì)胞壁外。磷壁酸抗原性很強(qiáng),是革蘭氏陽(yáng)性菌的重要表面抗原;在調(diào)節(jié)離子通過(guò)粘肽層中起作用;也可能與某些酶的活性有關(guān);某些細(xì)菌的磷壁酸,能粘附在人類細(xì)胞表面,其作用類似菌毛,可能與致病性有關(guān)。此外,某些革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁表面還有一些特殊的表面蛋白,如a蛋白等,都與致病有關(guān)。
革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)顯著不同,導(dǎo)致這兩類細(xì)菌在染色性、抗原性、毒性、對(duì)某些藥物的敏感性等方面的很大差異。
革蘭氏染色的結(jié)果取決于細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)即革蘭氏染色原理為:G﹢菌:細(xì)胞壁厚,肽聚糖網(wǎng)狀分子形成一種透性障,當(dāng)乙醇脫色時(shí),肽聚糖脫水而孔障縮小,故保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在細(xì)胞膜上。呈紫色。
Gˉ菌:肽聚糖層薄,交聯(lián)松散,乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮,其脂含量高,乙醇將脂溶解,縫隙加大,結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁,沙黃復(fù)染后呈紅色。革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁厚約20-80nm,有15-50層肽聚糖片層,含20-40%的磷壁酸。革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁厚約10nm,僅2-3層肽聚糖,另外還有脂多糖、細(xì)菌外膜和脂蛋白。
放線菌(Actinomycete)是另一大類革蘭氏陽(yáng)性菌,根據(jù)DNA中鳥嘌呤(G)和胞嘧啶(C)的含量,放線菌被稱為高G+C革蘭氏陽(yáng)性菌,而厚壁菌被稱為低G+C革蘭氏陽(yáng)性菌。如果細(xì)胞的第二層膜是衍生特征,這兩類革蘭氏陽(yáng)性菌可能是細(xì)菌基部的分支,否則它們可能組成關(guān)系相對(duì)較近的單系群。它們被認(rèn)為可能是古細(xì)菌和真核生物的祖先,因?yàn)樗鼈兌既狈Φ诙䦟幽�,并且具有一些生化上的相似性,比如含有固醇類。此外,盡管恐球菌-棲熱菌(Deinococcus-Thermus)類細(xì)菌結(jié)構(gòu)上類似革蘭氏陰性菌,但也可被染成革蘭氏陽(yáng)性
原理學(xué)說(shuō)
革蘭氏染色原理目前有三種觀點(diǎn):等電點(diǎn)學(xué)說(shuō)、化學(xué)學(xué)說(shuō)和滲透學(xué)說(shuō)。
等電點(diǎn)學(xué)說(shuō)
革蘭氏陽(yáng)性菌的等電點(diǎn)在pH2-3,比陰性菌(pH4-5)低,加之碘為弱氧化劑,可降低革蘭氏陽(yáng)性菌的等電點(diǎn),致使兩類菌的等電點(diǎn)差異擴(kuò)大,因此陽(yáng)性菌和堿性染料的結(jié)合力比陰性菌更強(qiáng)。
化學(xué)學(xué)說(shuō)
碘液在菌體內(nèi)與結(jié)晶紫結(jié)合后又和菌體內(nèi)核糖核酸鎂鹽-蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)合,此結(jié)合物不易被丙酮酒精脫掉,呈革蘭氏染色陽(yáng)性。因革蘭氏陰性菌缺乏核糖核酸鎂鹽,故對(duì)碘與結(jié)晶紫結(jié)合物攝取少,且不牢固,易被丙酮酒精脫色而呈革蘭氏染色陰性。
滲透學(xué)說(shuō)
乙醇使陽(yáng)性菌所含粘肽多糖脫水而致細(xì)胞壁間隙縮小,通透性降低,在菌體內(nèi)保留了染料-碘復(fù)合物,呈紫色。陰性菌含粘肽少,細(xì)胞壁變化不大,通透性不受影響,菌體內(nèi)的染料-碘復(fù)合物較易透出,失去紫色,被復(fù)染成為紅色。