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山東拓普生物工程有限公司

Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd

1106非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法  

1107非無(wú)菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)  

1105非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法  

微生物計(jì)數(shù)法系用于能在有氧條件下生長(zhǎng)的嗜溫細(xì)菌和真菌的計(jì)數(shù)。  

當(dāng)本法用于檢查非無(wú)菌制劑及其原、輔料等是否符合規(guī)定的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)按下述規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)，包括樣品的取樣量和結(jié)果的判斷等。除另有規(guī)定外，本法不適用于活菌制劑的檢查。  

學(xué)習(xí)：將舊版的“相應(yīng)”更換為“規(guī)定”，更便于按照1107進(jìn)行判定執(zhí)行。  

微生物計(jì)數(shù)試驗(yàn)環(huán)境應(yīng)符合微生物限度檢查的要求。檢驗(yàn)全過(guò)程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。潔凈空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期進(jìn)行監(jiān)測(cè)。  

學(xué)習(xí)：將舊版的“單向流空氣區(qū)域”更換為“潔凈空氣區(qū)域”。  

計(jì)數(shù)方法  

……供試品檢查時(shí)，應(yīng)根據(jù)供試品理化特性和微生物限度標(biāo)準(zhǔn)等因素選擇計(jì)數(shù)方法，檢測(cè)的樣品量應(yīng)能保證所獲得的試驗(yàn)結(jié)果能夠判斷供試品是否符合規(guī)定。所選方法的適用性須經(jīng)確認(rèn)�！���  

提示：后文增加了對(duì)于“貴重藥品、微量包裝藥品”的檢驗(yàn)量的更全面的表述，因注意結(jié)合此處的要求。  

計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查和供試品計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)  

……菌液制備……取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物加人適量含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或……  

學(xué)習(xí)：此處改動(dòng)同無(wú)菌檢查法，將“3~5ml”的具體量調(diào)整為“適量”，便于根據(jù)孢子的量靈活掌握菌液制備方法。  

培養(yǎng)基適用性檢查  

微生物計(jì)數(shù)用的商品化的預(yù)制培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查。  

學(xué)習(xí)：類似于無(wú)菌檢查法，此處將“成品培養(yǎng)基”修改為“商品化的預(yù)制培養(yǎng)基”，表述更準(zhǔn)確，下文還有，不再贅述。  

……計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)  

1.供試液制備  

根據(jù)供試品的理化特性與生物學(xué)特性，采取適宜的方法制備供試液。供試液制備若需加溫時(shí)，應(yīng)均勻加熱，且溫度不應(yīng)超過(guò)45°C。供試液從制備至加人檢驗(yàn)用培養(yǎng)基，不得超過(guò)1小時(shí)�！���  

學(xué)習(xí)：此處應(yīng)注意同時(shí)進(jìn)行數(shù)個(gè)品種計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)時(shí)的時(shí)效問題�！肮┰囈褐苽洹边@一節(jié)，水溶性供試品、水不溶性非油脂供試品、油脂類供試品的制備方法無(wú)變化。在2020版藥典中，將原“(4)需用特殊方法制備供試液的供試品”中的小類（四種）提升至與上述3類并列表述，除氣霧劑供試品外，制備方法無(wú)變化。具體是膜劑供試品、腸溶及結(jié)腸溶制劑供試品、氣霧劑供試品（2015版：氣霧劑、噴霧劑供試品）、貼劑、貼膏劑供試品（2015版：貼膏劑供試品）。注意：氣霧劑供試品變化較大，請(qǐng)注意自學(xué)。  

3.抗菌活性的去除或滅活  

供試液接種后，……中和劑或滅活劑（表2)可用于消除干擾物的抑菌活性，最好在稀釋液或培養(yǎng)基滅菌前加入。若使用中和劑或滅活劑，試驗(yàn)中應(yīng)設(shè)中和劑或滅活劑對(duì)照組，即取相應(yīng)量含中和劑或滅活劑的稀釋液替代供試品同試驗(yàn)組操作……  

學(xué)習(xí)：標(biāo)紅為增加內(nèi)容，在方法學(xué)中，這個(gè)這個(gè)對(duì)照組的稀釋液中顯然要含有相應(yīng)的中和劑或者滅活劑，進(jìn)一步明確，以防止錯(cuò)誤套用。  

……4.供試品中微生物的回收……涂布法“取15~20ml”修訂為“取適量（通常為15~20ml）”�！���(2)薄膜過(guò)濾法薄膜過(guò)濾法所采用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45jLtm，直徑一般為50mm,若采用其他直徑的濾膜，沖洗量應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。供試品及其溶劑應(yīng)不影響濾膜材質(zhì)對(duì)微生物的截留。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過(guò)濾前后的完整性。  

學(xué)習(xí)：這個(gè)“完整性”應(yīng)該類似生產(chǎn)過(guò)程所用的濾膜的完整性，不同的是“保證”的方法是濾器驗(yàn)收、廠家報(bào)告單、使用中外觀檢查等；必要時(shí)應(yīng)該進(jìn)行適當(dāng)方式的完整性檢測(cè)。  

MPN法本人未涉及，暫未自學(xué)。  

供試品檢查  

檢驗(yàn)量  

檢驗(yàn)量即一次試驗(yàn)所用的供試品量（g、ml或cm2)。一般應(yīng)隨機(jī)抽取不少于2個(gè)最小包裝的供試品，混合，取規(guī)定量供試品進(jìn)行檢驗(yàn)。  

除另有規(guī)定外，一般供試品的檢驗(yàn)量為10g或10ml;膜劑、貼劑和貼膏劑為100cm2。檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)從2個(gè)以上最小包裝單位中抽取供試品，大蜜丸還不得少于4丸，膜劑、貼劑和貼膏劑還不得少于4片。  

貴重藥品、微量包裝藥品的檢驗(yàn)量可以酌減。若供試品處方中每一劑量單位（如片劑、膠囊劑）活性物質(zhì)含量小于或等于1mg，或每1g或每lml(指制劑）活性物質(zhì)含量低于1mg時(shí)，檢驗(yàn)量應(yīng)不少于10個(gè)劑量單位或10g或10ml供試品；若樣品量有限或批產(chǎn)量極�。ㄈ纾盒∮�1000ml或1000g)的活性物質(zhì)供試品，除另有規(guī)定外，其檢驗(yàn)量最少為批產(chǎn)量的1%，檢驗(yàn)量更少時(shí)需要進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估；若批產(chǎn)量少于200的供試品，檢驗(yàn)量可減少至2個(gè)單位；批產(chǎn)量少于100的供試品，檢驗(yàn)量可減少至1個(gè)單位。  

學(xué)習(xí)：貴重藥品的檢驗(yàn)量算是有個(gè)依據(jù)了。但是作為技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)、法規(guī)，“貴重藥品”的定義是什么呢？搜索CDE、CFDI的網(wǎng)站無(wú)果，查到一個(gè)四川省的通知，不知真假，“關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)貴重藥品、高值醫(yī)用耗材和昂貴醫(yī)用設(shè)備采購(gòu)使用管理工作的通知”里面有云：“貴重藥品的定義為：四川省藥品集中采購(gòu)目錄中的專利、原研及單獨(dú)定價(jià)藥品，以及根據(jù)各地經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平、醫(yī)療機(jī)構(gòu)級(jí)別等次及功能任務(wù)等由各醫(yī)療機(jī)構(gòu)藥事管理委員會(huì)研究確定的日使用費(fèi)用較高的藥品；血管介入類、非血管介入類、骨科植入、神經(jīng)外科等植入和介入材料組成的消耗性器械定義為高值醫(yī)用耗材。要求各地嚴(yán)格控制兩類產(chǎn)品的使用比例。”  

供試品的檢查1.平皿法……培養(yǎng)和計(jì)數(shù)除另有規(guī)定外，胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板在30~35°C培養(yǎng)3~5天，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板在20~25°C培養(yǎng)5~7天，觀察菌落生長(zhǎng)情況，點(diǎn)計(jì)平板上生長(zhǎng)的所有菌落數(shù)，計(jì)數(shù)并報(bào)告。菌落蔓延生長(zhǎng)成片的平板不宜計(jì)數(shù)�！���  

學(xué)習(xí)：不宜計(jì)數(shù)，然后呢是否根據(jù)逐日的觀察情況綜合判斷，還是說(shuō)這種情況可以重試？是否需要調(diào)整培養(yǎng)基的含水量？一切需要等待官方培訓(xùn)了。另外，微生物的檢驗(yàn)應(yīng)該逐日觀察微生物生長(zhǎng)情況，以便于準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。  

1106非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法  

菌液制備……將生孢梭菌接種于梭菌增菌培養(yǎng)基中置厭氧條件30~35°C培養(yǎng)24~48小時(shí)或接種于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中30~35°C培養(yǎng)18~24小時(shí)。……  

提示：如果采用厭氧條件，那么你的厭氧方式是怎么實(shí)現(xiàn)的？通常是厭氧盒內(nèi)蠟燭燃燒法。  

控制菌檢查方法適用性試驗(yàn)  

……  

結(jié)果判斷上述試驗(yàn)若檢出試驗(yàn)菌，按此供試液制備法和控制菌檢查方法進(jìn)行供試品檢查；……  

提示：理解這句話對(duì)“沙門菌”的檢驗(yàn)很重要。即：沙門菌檢驗(yàn)樣本量20g，供試品和陽(yáng)性對(duì)照各需要10g樣品。  

培養(yǎng)基及其制備方法  

3.馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA)照無(wú)菌檢查法(通則1101)制備。  

提示：無(wú)菌檢查法中新增了這個(gè)PDA的處方、制法。注意其它培養(yǎng)基的滅菌條件和pH。  

對(duì)于控制菌的檢查而言，應(yīng)時(shí)刻注意1107中的要求，  

1107非無(wú)菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)  

非無(wú)菌藥品的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)是基于藥品的給藥途徑和對(duì)患者健康潛在的危害以及藥品的特殊性而制訂的。藥品生產(chǎn)、貯存、銷售過(guò)程中的檢驗(yàn)，藥用原料、輔料、中藥提取物及中藥飲片的檢驗(yàn)，新藥標(biāo)準(zhǔn)制訂，進(jìn)口藥品標(biāo)準(zhǔn)復(fù)核，考察藥品質(zhì)量及仲裁等，除另有規(guī)定外，其微生物限度均以本標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)。  

學(xué)習(xí)：中藥飲片的微生物限度檢查，還是來(lái)了。1108中藥飲片微生物限度檢查法請(qǐng)自學(xué)。  

表1非無(wú)菌化學(xué)藥品制劑、生物制品制劑、不含藥材原粉的中藥制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)  

注：①化學(xué)藥品制劑和生物制品制劑若含有未經(jīng)提取的動(dòng)植物來(lái)源的成分及礦物質(zhì)，還不得檢出沙門菌（10g或10ml)。  

求科普：礦物質(zhì)要檢測(cè)“沙門菌”……  

表2非無(wú)菌含藥材原粉的中藥制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)  

表中，……耐膽鹽格蘭陰性菌應(yīng)小于（1g或1ml）、……不得檢出白色念珠菌、梭菌（1g或1ml）。  

學(xué)習(xí)：增加了“1g”的表述，不在局限于1ml，便于檢驗(yàn)實(shí)踐；此條應(yīng)結(jié)合具體標(biāo)準(zhǔn)使用。  

8.除中藥飲片外，非無(wú)菌藥品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)照“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法（通則1105)”檢查；非無(wú)菌藥品的控制菌照“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法（通則1106)”檢查。各品種項(xiàng)下規(guī)定的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)解釋如下：  

I01cfu:可接受的最大菌數(shù)為20;  

102cfu:可接受的最大菌數(shù)為200;  

103cfu:可接受的最大菌數(shù)為2000;依此類推。  

中藥飲片的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)及控制菌檢查照“中藥飲片微生物限度檢查法”（通則1108)檢查；各品種項(xiàng)下規(guī)定的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)解釋如下：  

101cfu:可接受的最大菌數(shù)為50;  

102cfu:可接受的最大菌數(shù)為500;  

103cfu:可接受的最大菌數(shù)為5000;  

104cfu:可接受的最大菌數(shù)為50000;依此類推。  

學(xué)習(xí)：?jiǎn)瘟辛酥兴庯嬈�的合格�?biāo)準(zhǔn)，注意！  

9.本限度標(biāo)準(zhǔn)所列的控制菌對(duì)于控制某些藥品的微生物質(zhì)量可能并不全面，因此，對(duì)于原料、輔料及某些特定的制劑，根據(jù)原輔料及其制劑的特性和用途、制劑的生產(chǎn)工藝等因素，可能還需檢查其他具有潛在危害的微生物。  

10.除了本限度標(biāo)準(zhǔn)所列的控制菌外，藥品中若檢出其他可能具有潛在危害性的微生物，應(yīng)從以下方面進(jìn)行評(píng)估。  

藥品的給藥途徑：給藥途徑不同，其危害不同；  

藥品的特性：藥品是否促進(jìn)微生物生長(zhǎng)，或者藥品是否有足夠的抑制微生物生長(zhǎng)能力；  

藥品的使用方法；  

用藥人群：用藥人群不同，如新生兒、嬰幼兒及體弱者，風(fēng)險(xiǎn)可能不同；  

患者使用免疫抑制劑和甾體類固醇激素等藥品的情況；  

存在疾病、傷殘和器官損傷；等等。  

11.當(dāng)進(jìn)行上述相關(guān)因素的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估時(shí)，評(píng)估人員應(yīng)經(jīng)過(guò)微生物學(xué)和微生物數(shù)據(jù)分析等方面的專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)。評(píng)估原輔料微生物質(zhì)量時(shí)，應(yīng)考慮相應(yīng)制劑的生產(chǎn)工藝、現(xiàn)有的檢測(cè)技術(shù)及原輔料符合該標(biāo)準(zhǔn)的必要性。