[所屬分類:技術(shù)資料] [發(fā)布時(shí)間:2020-1-16] [發(fā)布人:] [閱讀次數(shù):] [返回]

山東拓普生物工程有限公司

Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
GB 4789.9—2014
食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 空腸彎曲菌檢驗(yàn)
2014-12-01 發(fā)布  2015-05-01 實(shí)施
GB 4789.9—2014
I
前 言
本標(biāo)準(zhǔn)代替 GB/T 4789.9-2008 《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 空腸彎曲菌檢驗(yàn)》。
本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T 4789.9-2008 相比，主要變化如下：
——修改了標(biāo)準(zhǔn)的中文名稱；
——修改了范圍；
——修改了設(shè)備和材料；
——修改了培養(yǎng)基和試劑；
——修改了樣品處理；
——?jiǎng)h除了藥物敏感性試驗(yàn)；
——?jiǎng)h除了第二法 全自動(dòng)酶聯(lián)熒光免疫分析儀篩選法。
GB 4789.9—2014
1
食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 空腸彎曲菌檢驗(yàn)
1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中空腸彎曲菌（Campylobacter jejuni）的檢驗(yàn)方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中空腸彎曲菌的檢驗(yàn)。
2 設(shè)備和材料
除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：
a)  恒溫培養(yǎng)箱：25 ℃±1 ℃、36 ℃±1 ℃、42 ℃±1 ℃；
b)  冰箱：2 ℃～5 ℃；
c)  恒溫振蕩培養(yǎng)箱：36 ℃±1 ℃、42 ℃±1 ℃；
d)  天平：感量 0.1 g；
e)  均質(zhì)器與配套均質(zhì)袋；
f)  振蕩器；
g)  無(wú)菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸頭；
h)  無(wú)菌錐形瓶：容量 100 mL、200 mL、2 000 mL；
i)  無(wú)菌培養(yǎng)皿：直徑 90 mm；
j)  pH 計(jì)或 pH 比色管或精密 pH 試紙；
k)  水浴裝置：36 ℃±1 ℃、100 ℃；
l)  微需氧培養(yǎng)裝置：提供微需氧條件（5% 氧氣、10% 二氧化碳和 85% 氮?dú)猓��?br /> m) 過(guò)濾裝置及濾膜（0.22 μm、0.45 μm）；
n)  顯微鏡：10 倍～100 倍，有相差功能；
o)  離心機(jī)：離心速度≥20000 g；
p)  比濁儀；
q)  微生物生化鑒定系統(tǒng)。
3 培養(yǎng)基和試劑
3.1 Bolton 肉湯（Bolton broth）：見(jiàn)附錄 A 中 A.1。
3.2 改良 CCD 瓊脂（modified Charcoal Cefoperazone Deoxycholate Agar, mCCDA）：見(jiàn)附錄 A 中 A.2。
3.3 哥倫比亞血瓊脂（Columbia blood agar）：見(jiàn)附錄 A 中 A.3。
3.4 布氏肉湯（Brucella broth）：見(jiàn)附錄 A 中 A.4。
3.5 氧化酶試劑：見(jiàn)附錄 A 中 A.5。
3.6 馬尿酸鈉水解試劑：見(jiàn)附錄 A 中 A.6。
3.7 Skirrow 血瓊脂（Skirrow blood agar）：見(jiàn)附錄 A 中 A.7。
3.8 吲哚乙酸酯紙片：見(jiàn)附錄 A 中 A.8。
3.9 0.1%蛋白胨水：見(jiàn)附錄 A 中 A.9。
3.10 1mol / L 硫代硫酸鈉（Na 2 S 2 O 3 ）溶液：見(jiàn)附錄 A 中 A.10。
GB 4789.9—2014
2
3.11 3%過(guò)氧化氫（H 2 O 2 ）溶液：見(jiàn)附錄 A 中 A.11。
3.12 空腸彎曲菌顯色培養(yǎng)基。
3.13 生化鑒定試劑盒或生化鑒定卡。
4 檢驗(yàn)程序
空腸彎曲菌檢驗(yàn)程序見(jiàn)圖 1。
圖 1 空腸彎曲菌檢驗(yàn)程序
24 h～48 h
樣品處理
Bolton 肉湯預(yù)增菌，微需氧
接種 Skirrow 與 mCCD 瓊脂平板，或顯色培養(yǎng)基
Bolton 肉湯增菌，微需氧
鏡 檢  動(dòng)力
試驗(yàn)
微需氧 25 ℃±1 ℃
生長(zhǎng)試驗(yàn)
有氧 42 ℃±1 ℃
生長(zhǎng)試驗(yàn)
氧化酶
試驗(yàn)
彎曲菌屬
過(guò)氧化氫酶
試驗(yàn)
吲哚乙酸酯水
解試驗(yàn)
馬尿酸鈉
水解試驗(yàn)
空腸彎曲菌
報(bào) 告
挑取可疑菌落，接種哥倫比亞血瓊脂平板
36 ℃±1 ℃  4 h
42 ℃±1 ℃
42 ℃±1 ℃
24 h～48 h
42 ℃±1 ℃
24 h～48 h
GB 4789.9—2014
3
5 操作步驟
5.1 樣品處理
5.1.1 一般樣品
取 25 g（mL) 樣品（水果、蔬菜、水產(chǎn)品為 50 g）加入盛有 225 mL Bolton 肉湯的有濾網(wǎng)的均質(zhì)袋
中（若為無(wú)濾網(wǎng)均質(zhì)袋可使用無(wú)菌紗布過(guò)濾），用拍擊式均質(zhì)器均質(zhì) 1 min～2 min，經(jīng)濾網(wǎng)或無(wú)菌紗布過(guò)
濾，將濾過(guò)液進(jìn)行培養(yǎng)。
5.1.2 整禽等樣品
用 200 mL 0.1%的蛋白胨水中充分沖洗樣品的內(nèi)外部，并振蕩 2 min～3 min，經(jīng)無(wú)菌紗布過(guò)濾至 250
mL 離心管中，16000 g 離心 15 min 后棄去上清，用 10 mL 0.1%蛋白胨水懸浮沉淀，吸取 3 mL 于 100 mL
Bolton 肉湯中進(jìn)行培養(yǎng)。
5.1.3 貝類
取至少 12 個(gè)帶殼樣品，除去外殼后將所有內(nèi)容物放到均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器均質(zhì) 1 min～2 min，
取25g樣品至225 mL Bolton肉湯中（1:10稀釋），充分震蕩后再轉(zhuǎn)移25 mL于225 mL Bolton肉湯中（1:100
稀釋），將 1:10 和 1:100 稀釋的 Bolton 肉湯同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。
5.1.4 蛋黃液或蛋漿
取 25 g （mL)樣品于 125 mL Bolton 肉湯中并混勻（1:6 稀釋），再轉(zhuǎn)移 25 mL 于 100 mL Bolton 肉
湯中并混勻（1:30 稀釋），同時(shí)將 1:6 和 1:30 稀釋的 Bolton 肉湯進(jìn)行培養(yǎng)。
5.1.5 鮮乳、冰淇淋、奶酪等
若為液體乳制品取 50 g；若為固體乳制品取 50 g 加入盛有 50 mL 0.1%蛋白胨水的有濾網(wǎng)均質(zhì)袋中，
用拍擊式均質(zhì)器均質(zhì) 15 s～30 s，保留過(guò)濾液。必要時(shí)調(diào)整 pH 值至 7.5±0.2，將液體乳制品或?yàn)V過(guò)液以
20000 g 離心 30 min 后棄去上清，用 10 mL Bolton 肉湯懸浮沉淀（盡量避免帶入油層），再轉(zhuǎn)移至 90 mL
Bolton 肉湯進(jìn)行培養(yǎng)。
5.1.6 需表面涂拭檢測(cè)的樣品
無(wú)菌棉簽擦拭檢測(cè)樣品的表面（面積至少 100 cm 2 以上），將棉簽頭剪落到 100 mL Bolton 肉湯中進(jìn)
行培養(yǎng)。
5.1.7 水樣
將 4 L 的水（對(duì)于氯處理的水，在過(guò)濾前每升水中加入 5 mL 1mol/L 硫代硫酸鈉溶液）經(jīng) 0.45 μm
濾膜過(guò)濾，把濾膜浸沒(méi)在 100 mL Bolton 肉湯中進(jìn)行培養(yǎng)。
5.2 預(yù)增菌與增菌
在微需氧條件下，36 ℃±1 ℃培養(yǎng) 4 h，如條件允許配以 100 r/min 的速度進(jìn)行振蕩。必要時(shí)測(cè)定增菌
液的 pH 值并調(diào)整至 7.4 ± 0.2，42 ℃±1 ℃繼續(xù)培養(yǎng) 24 h～48 h。
5.3 分離
將 24 h 增菌液、48 h 增菌液及對(duì)應(yīng)的 1:50 稀釋液分別劃線接種于 Skirrow 血瓊脂與 mCCDA 瓊脂平
板上，微需氧條件下 42 ℃±1 ℃培養(yǎng) 24 h～48 h。另外可選擇使用空腸彎曲菌顯色平板作為補(bǔ)充。
GB 4789.9—2014
4
觀察24 h培養(yǎng)與48 h培養(yǎng)的瓊脂平板上的菌落形態(tài)，mCCDA瓊脂平板上的可疑菌落通常為淡灰色，
有金屬光澤、潮濕、扁平，呈擴(kuò)散生長(zhǎng)的傾向。Skirrow 血瓊脂平板上的第一型可疑菌落為灰色、扁平、
濕潤(rùn)有光澤，呈沿接種線向外擴(kuò)散的傾向；第二型可疑菌落常呈分散凸起的單個(gè)菌落，邊緣整齊、發(fā)亮。
空腸彎曲菌顯色培養(yǎng)基上的可疑菌落按照說(shuō)明進(jìn)行判定。
5.4 鑒定
5.4.1 彎曲菌屬的鑒定
5.4.1.1 概述
挑取 5 個(gè)（如少于 5 個(gè)則全部挑�。┗蚋�多的可疑菌落接種到哥倫比亞血瓊脂平板上，微需氧條件
下 42 ℃±1 ℃培養(yǎng) 24 h～48 h，按照 5.4.1.1～5.4.1.5 進(jìn)行鑒定，結(jié)果符合表 1 的可疑菌落確定為彎曲菌
屬。
表 1 彎曲菌屬的鑒定
項(xiàng) 目  彎曲菌屬特性
形態(tài)觀察
革蘭氏陰性，菌體彎曲如小逗點(diǎn)狀，兩菌體的末端相接時(shí)呈 S
形、螺旋狀或海鷗展翅狀
a
動(dòng)力觀察  呈現(xiàn)螺旋狀運(yùn)動(dòng)
b
氧化酶試驗(yàn)  陽(yáng) 性
微需氧條件下 25 ℃±1 ℃生長(zhǎng)試驗(yàn)  不生長(zhǎng)
有氧條件下 42 ℃±1 ℃生長(zhǎng)試驗(yàn)  不生長(zhǎng)
a 有些菌株的形態(tài)不典型。
b 有些菌株的運(yùn)動(dòng)不明顯。
5.4.1.2 形態(tài)觀察
挑取可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢。
5.4.1.3 動(dòng)力觀察
挑取可疑菌落用 1 mL 布氏肉湯懸浮，用相差顯微鏡觀察運(yùn)動(dòng)狀態(tài)。
5.4.1.4 氧化酶試驗(yàn)
用鉑/銥接種環(huán)或玻璃棒挑取可疑菌落至氧化酶試劑潤(rùn)濕的濾紙上，如果在 10 s 內(nèi)出現(xiàn)紫紅色、紫羅
蘭或深藍(lán)色為陽(yáng)性。
5.4.1.5 微需氧條件下 25 ℃±1 ℃生長(zhǎng)試驗(yàn)
挑取可疑菌落，接種到哥倫比亞血瓊脂平板上，微需氧條件下 25 ℃±1 ℃培養(yǎng) 44 h±4 h，觀察細(xì)菌
生長(zhǎng)情況。
5.4.1.6 有氧條件下 42 ℃±1 ℃生長(zhǎng)試驗(yàn)
挑取可疑菌落，接種到哥倫比亞血瓊脂平板上，有氧條件下 42 ℃±1 ℃培養(yǎng) 44 h±4 h，觀察細(xì)菌生
長(zhǎng)情況。
5.4.2 空腸彎曲菌的鑒定
5.4.2.1 過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)
GB 4789.9—2014
5
挑取菌落，加到干凈玻片上的 3%過(guò)氧化氫溶液中，如果在 30 s 內(nèi)出現(xiàn)氣泡則判定結(jié)果為陽(yáng)性。
5.4.2.2 馬尿酸鈉水解試驗(yàn)
挑取菌落，加到盛有 0.4 mL 1%馬尿酸鈉的試管中制成菌懸液�；旌暇鶆蚝笤� 36 ℃±1 ℃水浴中溫育
2 h 或 36 ℃±1 ℃培養(yǎng)箱中溫育 4 h。沿著試管壁緩緩加入 0.2 mL 茚三酮溶液，不要振蕩，在 36 ℃±1 ℃
的水浴或培養(yǎng)箱中再溫育 10 min 后判讀結(jié)果。若出現(xiàn)深紫色則為陽(yáng)性；若出現(xiàn)淡紫色或沒(méi)有顏色變化則
為陰性。
5.4.2.3 吲哚乙酸酯水解試驗(yàn)
挑取菌落至吲哚乙酸酯紙片上，再滴加一滴滅菌水。如果吲哚乙酸酯水解，則在 5 min～10 min 內(nèi)
出現(xiàn)深藍(lán)色；若無(wú)顏色變化則表示沒(méi)有發(fā)生水解�？漳c彎曲菌的鑒定結(jié)果見(jiàn)表 2。
表 2 空腸彎曲菌的鑒定
特征
空腸彎曲菌
（C. jejuni）
結(jié)腸彎曲菌
（C. coli）
海鷗彎曲菌
（C. lari）
烏普薩拉彎曲菌
(C. upsaliensis)
過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)  ＋  ＋  ＋  －或微弱
馬尿酸鹽水解試驗(yàn)  ＋  －  －  －
吲哚乙酸脂水解試驗(yàn)  ＋  ＋  －  ＋
注：＋表示陽(yáng)性；－表示陰性。
5.4.2.4 替代試驗(yàn)
對(duì)于確定為彎曲菌屬的菌落，可使用生化鑒定試劑盒或生化鑒定卡代替 5.4.2.1~5.4.2.3 進(jìn)行鑒定。
5.5 結(jié)果報(bào)告
綜合以上試驗(yàn)結(jié)果，報(bào)告檢樣單位中檢出或未檢出空腸彎曲菌。
GB 4789.9—2014
6
附錄 A
培養(yǎng)基與試劑
A.1 Bolton 肉湯 （Bolton broth）
A.1.1 基礎(chǔ)培養(yǎng)基
A.1.1.1 成分
動(dòng)物組織酶解物  10.0 g
乳白蛋白水解物  5.0 g
酵母浸膏  5.0 g
氯化鈉  5.0 g
丙酮酸鈉  0.5 g
偏亞硫酸氫鈉  0.5 g
碳酸鈉  0.6 g
α-酮戊二酸  1.0 g
蒸餾水  1 000.0 mL
A.1.1.2 制法
將 A.1.1.1 中各成分溶于蒸餾水中，121 ℃ 滅菌 15 min，備用。
A.1.2 無(wú)菌裂解脫纖維綿羊或馬血
對(duì)無(wú)菌脫纖維綿羊或馬血通過(guò)反復(fù)凍融進(jìn)行裂解或使用皂角苷進(jìn)行裂解。
A.1.3 抗生素溶液
A.1.3.1 成分
頭孢哌酮 (cefoperazone)  0.02 g
萬(wàn)古霉素（vancomycin）  0.02 g
三甲氧芐胺嘧啶乳酸鹽（trimethoprim lactate） 0.02 g
兩性霉素 B（amphotercin B）  0.01 g
多粘菌素 B（polymyxin B）  0.01 g
乙醇 / 滅菌水 （50 /50，體積分?jǐn)?shù)）  5.0 mL
A.1.3.2 制法
將 A.1.3.1 中各成分溶解于乙醇/滅菌水混合溶液中。
A.1.4 完全培養(yǎng)基
A.1.4.1 成分
基礎(chǔ)培養(yǎng)基 1 000.0 mL
無(wú)菌裂解脫纖維綿羊或馬血  50.0 mL
抗生素溶液  5.0 mL
GB 4789.9—2014
7
A.1.4.2 制法
當(dāng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基的溫度約為 45 ℃左右時(shí)，無(wú)菌加入綿羊或馬血和抗生素溶液，混勻，校正 pH 至 7.4
±0.2（25 ℃），常溫下放置不得超過(guò) 4 h，或在 4 ℃左右避光保存不得超過(guò) 7 d。
A.2 改良 CCD 瓊脂 (modified Charcoal Cefoperazone Deoxycholate Agar, mCCDA)
A.2.1 基礎(chǔ)培養(yǎng)基
A.2.1.1 成分
肉浸液  10.0 g
動(dòng)物組織酶解物  10.0 g
氯化鈉  5.0 g
木炭  4.0 g
酪蛋白酶解物  3.0 g
去氧膽酸鈉  1.0 g
硫酸亞鐵  0.25 g
丙酮酸鈉  0.25 g
瓊脂  8.0 g～18.0 g
蒸餾水  1 000.0 mL
A.2.1.2 制法
將 A.2.1.1 中各成分溶于蒸餾水中，121 ℃ 滅菌 15 min，備用。
A.2.2 抗生素溶液
A.2.2.1 成分
頭孢哌酮（cefoperazone）  0.032 g
兩性霉素 B（amphotericin B）  0.01 g
利福平（rifampicin）  0.01 g
乙醇 / 滅菌水（50 /50，體積分?jǐn)?shù)）  5.0 mL
A.2.2.2 制法
將 A.2.2.1 中各成分溶解于乙醇/滅菌水混合溶液中。
A.2.3 完全培養(yǎng)基
A.2.3.1 成分
基礎(chǔ)培養(yǎng)基 1 000.0 mL
抗生素溶液  5.0 mL
A.2.3.2 制法
當(dāng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基的溫度約為 45 ℃左右時(shí)，加入抗生素溶液，混勻。校正 pH 至 7.4±0.2（25 ℃）。傾
注 15 mL 于無(wú)菌平皿中，靜置至培養(yǎng)基凝固。使用前需預(yù)先干燥平板。制備的平板未干燥時(shí)在室溫放置
不得超過(guò) 4 h，或在 4 ℃左右冷藏不得超過(guò) 7 d。
A.3 哥倫比亞血瓊脂（Columbia blood agar）
GB 4789.9—2014
8
A.3.1 基礎(chǔ)培養(yǎng)基
A.3.1.1 成分
動(dòng)物組織酶解物  23.0 g
淀粉  1.0 g
氯化鈉  5.0 g
瓊脂  8.0g～18.0 g
蒸餾水  1 000.0 mL
A.3.1.2 制法
將 A.3.1.1 成分溶于蒸餾水中，121 ℃ 滅菌 15 min，備用。
A.3.2 無(wú)菌脫纖維綿羊血
無(wú)菌操作條件下，將綿羊血倒入盛有滅菌玻璃珠的容器中，振搖約 10 min，靜置后除去附有血纖維
的玻璃珠即可。
A.3.3 完全培養(yǎng)基
A.3.3.1 成分
基礎(chǔ)培養(yǎng)基  1 000.0 mL
無(wú)菌脫纖維綿羊血 50.0 mL
A.3.3.2 制法
當(dāng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基的溫度為 45 ℃左右時(shí)，無(wú)菌加入綿羊血，混勻。校正 pH 至 7.3±0.2（25 ℃）。傾注
15 mL 完全培養(yǎng)基于無(wú)菌平皿中，靜置至培養(yǎng)基凝固。制備的平板未干燥時(shí)在室溫放置不得超過(guò) 4 h，
或在 4 ℃左右冷藏不得超過(guò) 7 d。
A.4 布氏肉湯 (Brucella broth)
A.4.1 成分
酪蛋白酶解物  10.0 g
動(dòng)物組織酶解物  10.0 g
葡萄糖  1.0 g
酵母浸膏  2.0 g
氯化鈉  5.0 g
亞硫酸氫鈉  0.1 g
蒸餾水  1 000.0 mL
A.4.2 制法
將 A.4.1 中各成分溶于蒸餾水中，校正 pH 至 7.0±0.2（25 ℃），121 ℃ 滅菌 15 min，備用。
A.5 氧化酶試劑
A.5.1 成分
四甲基對(duì)苯二胺鹽酸鹽  1.0 g
GB 4789.9—2014
9
蒸餾水  100.0 mL
A.5.2 制法
使用前將 A.5.1 中各成分溶于蒸餾水中。
A.6 馬尿酸鈉水解試劑
A.6.1 馬尿酸鈉溶液
A.6.1.1 成分
馬尿酸鈉  10.0 g
磷酸鹽緩沖液（PBS）組分： 
氯化鈉  8.5 g
磷酸氫二鈉  8.98 g
磷酸二氫鈉  2.71 g
蒸餾水  1 000.0 mL
A.6.1.2 制法
將馬尿酸鈉溶于磷酸鹽緩沖溶液中，過(guò)濾除菌。無(wú)菌分裝，每管 0.4 mL，儲(chǔ)存于-20 ℃。
A.6.2 3.5% (水合)茚三酮溶液 (質(zhì)量/體積)
A.6.2.1 成分
（水合）茚三酮 （ninhydrin）  1.75 g
丙酮  25.0 mL
丁醇 25.0 mL
A.6.2.2 制備
將（水合）茚三酮溶解于丙酮/丁醇混合液中。該溶液在避光冷藏時(shí)不超過(guò) 7 d。
A.7 Skirrow 血瓊脂 （Skirrow blood agar）
A.7.1 基礎(chǔ)培養(yǎng)基
A.7.1.1 成分
蛋白胨  15.0 g
胰蛋白胨  2.5 g
酵母浸膏  5.0 g
氯化鈉 5.0 g
瓊脂  15.0 g
蒸餾水  1 000.0 mL
A.7.1.2 制法
將 A.7.1.1 中各成分溶于蒸餾水中，121 ℃ 滅菌 15 min，備用。
A.7.2 FBP 溶液
A.7.2.1 成分
GB 4789.9—2014
10
丙酮酸鈉  0.25 g
焦亞硫酸鈉  0.25 g
硫酸亞鐵  0.25 g
蒸餾水  100.0 mL
A.7.2.2 制法
將 A.7.2.1 中各成分溶于蒸餾水中，經(jīng) 0.22 μm 濾膜過(guò)濾除菌。FBP 根據(jù)需要量現(xiàn)用現(xiàn)配，在-70 ℃
儲(chǔ)存不超過(guò) 3 個(gè)月或-20 ℃儲(chǔ)存不超過(guò) 1 個(gè)月。
A.7.3 抗生素溶液
A.7.3.1 成分
頭孢哌酮（cefoperazone）  0.032 g
兩性霉素 B（amphotericin B）  0.01 g
利福平（rifampicin）  0.01 g
乙醇 / 滅菌水（50 /50，體積
分?jǐn)?shù)）
5.0 mL
A.7.3.2 制法
將 A.7.3.1 中各成分溶解于乙醇/滅菌水混合溶液中。
A.7.4 無(wú)菌脫纖維綿羊血
無(wú)菌操作條件下，將綿羊血倒入盛有滅菌玻璃珠的容器中，振搖約 10 min，靜置后除去附有血纖維
的玻璃珠即可。
A.7.5 完全培養(yǎng)基
A.7.5.1 成分
基礎(chǔ)培養(yǎng)基 1 000.0 mL
FBP 溶液 5.0 mL
抗生素溶液 5.0 mL
無(wú)菌脫纖維綿羊血 50.0 mL
A.7.5.2 制法
當(dāng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基的溫度約為 45 ℃左右時(shí)，加入 FBP 溶液、抗生素溶液與凍融的無(wú)菌脫纖維綿羊血，
混勻。校正 pH 至 7.4±0.2（25 ℃）。傾注 15 mL 于無(wú)菌平皿中，靜置至培養(yǎng)基凝固。預(yù)先制備的平板
未干燥時(shí)在室溫放置不得超過(guò) 4 h，或在 4 ℃左右冷藏不得超過(guò) 7 d。
A.8 吲哚乙酸酯紙片
A.8.1 成分
吲哚乙酸脂  0.1 g
丙酮  1.0 mL
A.8.2 制法
GB 4789.9—2014
11
將吲哚乙酸脂溶于丙酮中，吸取 25 μL～50 μL 溶液于空白紙片上（直徑為 0.6 cm～1.2 cm）。室溫干
燥，用帶有硅膠塞的棕色試管/瓶于 4 ℃保存。
A.9 0.1%蛋白胨水
A.9.1 成分
蛋白胨  1.0 g
蒸餾水  1 000.0 mL
A.9.2 制法
將蛋白胨溶解于蒸餾水中，校正 pH 至 7.0 ± 0.2（25 ℃），121 ℃高壓滅菌 15 min。
A.10 1 mol/L 硫代硫酸鈉（Na 2 S 2 O 3 ）溶液
A.10.1 成分
硫代硫酸鈉（無(wú)水）  160.0 g
碳酸鈉（無(wú)水）  2.0 g
蒸餾水  1 000.0 mL
A.10.2 制法
稱取 160 g 無(wú)水硫代硫酸鈉，加入 2g 無(wú)水碳酸鈉，溶于 1000 mL 水中，緩緩煮沸 10min，冷卻。
A.11 3％過(guò)氧化氫(H 2 O 2 )溶液
A.11.1 成分
30％過(guò)氧化氫(H 2 O 2 )溶液  100.0 mL
蒸餾水  900.0 mL
A.11.2 制法
吸取100mL30％過(guò)氧化氫(H 2 O 2 )溶液，溶于900mL蒸餾水中，混勻，分裝備用。