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中 華 人 民 共 和 國(guó) 國(guó) 家 標(biāo) 準(zhǔn)
GB4789. 16 — 2016
食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
食品微生物學(xué)檢驗(yàn)
常見產(chǎn)毒霉菌的形態(tài)學(xué)鑒定
2016-12-23 發(fā)布 2017-06-23 實(shí)施
中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)
國(guó) 家 食 品 藥 品 監(jiān) 督 管 理 總 局
發(fā) 布
GB4789. 16 — 2016
Ⅰ
前 言
本標(biāo)準(zhǔn)代替 GB / T4789. 16 — 2003 《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 常見產(chǎn)毒霉菌的鑒定》
本標(biāo)準(zhǔn)與 GB / T4789.
16 — 2003 相比,主要修改如下:
———標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為“食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 常見產(chǎn)毒霉菌的形態(tài)學(xué)鑒定”;
———增加了檢驗(yàn)程序;
———增加了黑曲霉、炭黑曲霉、棒曲霉、紅曲霉等產(chǎn)毒菌種;
———修改了標(biāo)準(zhǔn)名稱;
———修改了設(shè)備和材料;
———修改了培養(yǎng)基和試劑;
———修改了各菌種形態(tài)描述;
———修改了附錄 A ;
———?jiǎng)h除了黃綠青霉、島青霉、皺褶青霉、產(chǎn)紫青霉、紅青霉等菌種;
———?jiǎng)h除檢索表原附錄 B 、附錄 C 、附錄 D 。
GB4789. 16 — 2016
1
食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
食品微生物學(xué)檢驗(yàn)
常見產(chǎn)毒霉菌的形態(tài)學(xué)鑒定
1  范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中常見產(chǎn)毒真菌的鑒定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于曲霉屬(
Aspergillus )、青霉屬( Penicillium )、鐮刀菌屬( Fusarium )及其他菌屬中常
見產(chǎn)毒真菌的鑒定。
2  設(shè)備和材料
除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下:
2. 1  冰箱: 2℃~5℃ 。
2. 2  恒溫培養(yǎng)箱: 25℃±1℃ 。
2. 3  顯微鏡: 10 倍 ~100 倍。
2. 4  目鏡測(cè)微尺。
2. 5  物鏡測(cè)微尺。
2. 6  生物安全柜。
2. 7  恒溫水浴箱。
2. 8  接種鉤。
2. 9  分離針。
2. 10  載玻片。
2. 11  蓋玻片。
2. 12  不銹鋼小刀或眼科手術(shù)小刀。
3  試劑和培養(yǎng)基
3. 1  乳酸苯酚液:見 A. 1 。
3. 2  查氏培養(yǎng)基:見 A. 2 。
3. 3  馬鈴薯 - 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基:見 A. 3 。
3. 4  麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基:見 A. 4 。
3. 5  無糖馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基:見 A. 5 。
4  操作步驟
4. 1  菌落特征觀察:為了培養(yǎng)完整的菌落以供觀察記錄,可將純培養(yǎng)物點(diǎn)種于平板上。曲霉、青霉通常
接種查氏培養(yǎng)基,鐮刀菌通常需要同時(shí)接種多種培養(yǎng)基,其他真菌一般使用馬鈴薯 - 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。
將平板倒轉(zhuǎn),向上接種一點(diǎn)或三點(diǎn),每個(gè)菌株接種兩個(gè)平板,正置于 25 ℃±1 ℃ 恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培
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養(yǎng)。當(dāng)剛長(zhǎng)出小菌落時(shí),取出一個(gè)平皿以無菌操作,用滅菌不銹鋼小刀或眼科手術(shù)小刀將菌落連同培養(yǎng)
基切下 1cm×2cm 的小塊,置菌落一側(cè),繼續(xù)培養(yǎng),于 5d~14d 進(jìn)行觀察。此法代替小培養(yǎng)法,可觀
察子實(shí)體著生狀態(tài)。
4. 2  斜面觀察:將真菌純培養(yǎng)物劃線接種(曲霉、青霉)或點(diǎn)種(鐮刀菌或其菌)于斜面,培養(yǎng) 5d~14d ,
觀察菌落形態(tài),同時(shí)還可以直接將試管斜面置低倍顯微鏡下觀察孢子的形態(tài)和排列。
4. 3  制片:取載玻片加乳酸苯酚液一滴,用接種鉤取一小塊真菌培養(yǎng)物,置乳酸 - 苯酚液中,用兩支分離
針將培養(yǎng)物輕輕撕成小塊,切忌涂抹,以免破壞真菌結(jié)構(gòu)。然后加蓋玻片,如有氣泡,可在酒精燈上加熱
排除。制片時(shí)應(yīng)在生物安全柜或無菌接種罩或接種箱或手套箱內(nèi)操作以防孢子飛揚(yáng)。
4. 4  鏡檢:觀察真菌菌絲和孢子的形態(tài)、特征、孢子的排列等,并記錄。
5  檢驗(yàn)程序
常見產(chǎn)毒霉菌的形態(tài)學(xué)鑒定檢驗(yàn)程序見圖 1 。
圖 1  常見產(chǎn)毒霉菌的形態(tài)學(xué)鑒定檢驗(yàn)程序
6  各屬真菌的形態(tài)特征及可能產(chǎn)生的真菌毒素
6. 1  曲霉屬( Aspergillus )
本屬的產(chǎn)毒真菌主要包括黃曲霉、寄生曲霉、雜色曲霉、構(gòu)巢曲霉、赭曲霉、黑曲霉、炭黑曲霉和棒曲
霉等。這些真菌可能產(chǎn)生黃曲霉毒素、赭曲霉毒素、伏馬菌素、展青霉素等次生代謝產(chǎn)物。
曲霉屬的菌絲體無色透明或呈明亮的顏色,但不呈暗污色;可育的分生孢梗莖以大體垂直的方向從
特化的厚壁的足細(xì)胞生出,光滑或粗糙,通常無橫隔;頂端膨大形成頂囊,具不同形狀,從其表面形成瓶
梗,或先產(chǎn)生�；�,再?gòu)墓；�上形成瓶�?最后由瓶梗產(chǎn)生分生孢子。分生孢子單胞,具不同形狀和各種
顏色,光滑或具紋飾,連接成不分枝的鏈。由頂囊到分生孢子鏈構(gòu)成不同形狀的分生孢子頭,顯現(xiàn)不同
顏色。有的種可形成厚壁的殼細(xì)胞,形狀因種而異;有的種則可形成菌核或類菌核結(jié)構(gòu);還有的種產(chǎn)生
有性階段,形成閉囊殼,內(nèi)含子囊和子囊孢子,子囊孢子大多透明或具不同顏色、形狀和紋飾。
6. 1. 1  黃曲霉( A . flavus )
菌落在查氏瓊脂上生長(zhǎng)迅速,
25℃7d 直徑 35mm~40mm ( ~70mm ), 12d~14d 達(dá) 55mm~
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70mm ;質(zhì)地主要為致密絲絨狀,有時(shí)稍現(xiàn)絮狀或中央部分呈絮狀,平坦或現(xiàn)輻射狀至不規(guī)則的溝紋;分
生孢子結(jié)構(gòu)多,顏色為黃綠至草綠色,初期較淡,老后稍深,大多近于淺水芹綠色( LightCressGreen→
CressGreen , R.XXXI ),也有呈木犀綠色( MignonetteGreen , R.XXXI ),暗草綠色( Kronberg ’ sGreen ,
R.XXXI )或翡翠綠色( JadeGreen , R.XXXI )者,有的菌株初期現(xiàn)黃色,近于鍶黃( Strontium Yellow , R.
XVI ),而后變綠;一般無滲出液;有的菌株形成少量或大量菌核,大量時(shí),影響菌落外觀,伴隨有滲出液,
無色至淡褐色,菌落反面無色至淡褐色,產(chǎn)生菌核的菌株,在形成菌核處的反面顯現(xiàn)黑褐色斑點(diǎn)。分生
孢子頭初為球形,后呈輻射形,(
80~ ) 200~500 ( ~800 )
μ m ,或裂成幾個(gè)疏松的柱狀體,也有少數(shù)呈短柱
狀者;分生孢子梗大多生自基質(zhì),孢梗莖(
200~ ) 400~800 ( ~3000 )
μ m× (
4~ ) 9. 6~16 ( ~20 )
μ m ,壁
厚,無色,粗糙至很粗糙;頂囊近球形至燒瓶形,直徑(
9~ ) 23~50 ( ~65 )
μ m ,大部表面可育,小者僅上部
可育;產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)雙層:梗基 6.
2~13. 2 ( 19~ ) ×3. 2 μ m×6 μ m ,瓶梗 6. 2~12 μ m×2. 4~4 μ m ,有的小頂
囊只生瓶梗;分生孢子多為球形或近球形(
2. 4~ ) 3. 6~4. 8 ( ~6. 4 )
μ m ,少數(shù)呈橢圓形 3.
2~5. 2 μ m×
2. 7~4. 2 μ m ,壁稍粗糙至具小刺;有的菌株產(chǎn)生菌核,初為白色,老后呈褐黑色,球形或近球形,大小或
數(shù)量各異,一般為(
280~ ) 420~980 μ m ,見圖 2 。
黃曲霉的某些菌株可產(chǎn)生黃曲霉毒素( Aflatoxins )。
圖 2  黃曲霉的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)和分生孢子
6. 1. 2  寄生曲霉 ( A . parasiticus )
菌落在查氏瓊脂上 25℃7d 直徑 35mm , 12d~14d50mm~60mm ;質(zhì)地絲絨狀,偶有絮狀菌
絲,邊緣白色;分生孢子結(jié)構(gòu)多,顏色為深綠色,近于雪松綠(
CedarGreen , R.VI ),老后變暗近于常春藤
綠(
IvyGreen , R.XXXI );有輻射狀溝紋,無滲出液,菌落反面呈淡褐色,近于淺灰褐色( LightDrab , R.
VLVI )。分生孢子頭初為球形,后呈輻射形,直徑 84 μ m~210 μ m ;分生孢子梗生自基質(zhì),孢梗莖 140~
420 ( ~800 )
μ m×6~12 μ m ,壁現(xiàn)粗糙,也有近于光滑者;頂囊為杵形或燒瓶形,直徑(
13. 8~ ) 17~
31 μ m ,大部表面可育;產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)單層,瓶梗 6.2~10.6 μ m×2.4~4 μ m ,偶爾可觀察到較長(zhǎng)者可達(dá)
15 μ m ,中間具一隔壁;分生孢子球形或近球形,( 3. 6~ ) 4. 2~5. 5 ( ~6. 4 )
μ m ,壁稍粗糙,具粗硫小刺;未
見菌核,見圖 3 。
寄生曲霉的菌株都能產(chǎn)生黃曲霉毒素。
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圖 3  寄生曲霉的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)和分生孢子
6. 1. 3  雜色曲霉 ( A . versicolor )
菌落在查氏瓊脂上生長(zhǎng)局限,
25℃7d 直徑 15mm~17mm , 10d~12d 達(dá) 24mm~30mm ;質(zhì)地
為絲絨狀或絮狀,或兩種質(zhì)地并存或相互鑲嵌;菌落不平,稍厚,中央部分隆起或凹陷,或呈不同程度的
翹曲;顏色差異很大,初為白色,后呈不同程度的綠色,近于青豆綠、阿�；ňG( PoisGreen , Asphodel
Green , R.XLI )至深葡萄綠( DeepGrapeGreen , R.XLI ),有的菌株呈孔雀綠( MalachiteGreen , R.XXX
Ⅱ ),橄欖綠( OliveGreen , R.Ⅳ )或暗橄欖褐色( DarkOliveBuff , R.XL ),間或有不呈綠色者,取決于分
生孢子結(jié)構(gòu)的多少;菌絲體呈黃褐色、粉紅色,近于淺褐粉紅色(
BuffyPink , R.XXLⅢ )或淡粉紅肉桂色
(
PalePinkishCinnamrn , R.XXIX ),因不同菌株而異;分生孢子結(jié)構(gòu)有時(shí)形成遲緩;有輻射狀溝紋;滲
出液有或無,近于無色或呈淡褐色至紫紅色,形成小滴或聚成大滴;無明顯氣味或稍具霉味;菌落反面顏
色不一,近于無色至淡黃褐色、粉紅色、玫瑰紫色或紫褐色,色素?cái)U(kuò)散于基質(zhì);有的菌株形成殼細(xì)胞,老培
養(yǎng)物中可見聚成淡黃色的團(tuán)塊。分生孢子頭較小,初為球形,后呈輻射形,直徑(
25~ ) 75~125 μ m ;分
生孢梗莖直接生自基質(zhì)者(
45~ ) 150~300 ( ~500 )
μ m×4~8 μ m ,生自氣生菌絲者大都很短,無色或稍
帶黃色,壁較厚,光滑;頂囊半球形、稍長(zhǎng)形或稍呈橢圓形,直徑 9~20 μ m ,約 3 / 4 的表面可育,小頂囊僅
分生孢梗莖頂部稍加膨大而不明顯;產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)雙層:�；�一�� 5~8 μ m×2~3 μ m ,瓶梗 6~8 μ m×1.
5
~2. 5 μ m ;分生孢子球形或近球形,綠色,直徑( 2~ ) 2. 5~3. 5 ( ~4 )
μ m ,壁粗糙,具小刺;殼細(xì)胞球形或近
球形,直徑 11 μ m~20 μ m ,大量形成時(shí)聚成淡黃色的團(tuán)塊,見圖 4 。
雜色曲霉的某些菌株可產(chǎn)生雜色曲霉素(
sterigmatocystin )。
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說明:
1 , 4 ———產(chǎn)孢結(jié)構(gòu);
2
———不完整的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu);
3 , 5 ———分生孢子;
6
———?dú)ぜ?xì)胞。
圖 4  雜色曲霉的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)、分生孢子和殼細(xì)胞
6. 1. 4  構(gòu)巢裸胞殼( Emericellanidulans )
無性型:構(gòu)巢曲霉(
A . nidulans )
菌落在查氏瓊脂上 25℃7d 直徑 25mm 左右,
12d~14d45mm~65mm ;質(zhì)地絲絨狀或絮狀,平
坦或具不明顯的放射溝紋;分生孢子結(jié)構(gòu)大量或較少,呈不同程度的綠色,近于翡翠綠至水芹綠(
Jade
Green→CressGreen , R.XXXI )或林肯綠至阿�；ňG( LincolnGreen→AsphodelGreen , R.XLI )乃至
淺黃橄欖色(
LightYellowishOlive , R.XXX );有部分閉囊殼散在其間,有的菌株產(chǎn)生大量的閉囊殼,由
殼細(xì)胞所包圍,使表面顯現(xiàn)黃色團(tuán)塊或絮狀顆粒結(jié)構(gòu),使菌落帶黃褐色,近于鹿褐色、淺黃褐色或古銅色
(
FawnColor , BuffyBrown , R.XL ; IsabellaColor , R.XXX );滲出液多、少或無,呈淡紅褐至紫褐色;無
氣味;菌落反面淡紫褐色至紫褐色,近于葡萄酒鹿褐色( VinaceousFawn ,
R.XL ),稍擴(kuò)散于基質(zhì)。閉囊
殼球形,暗紫紅色,直徑 100~250 ( ~300 )
μ m ,外面由殼細(xì)胞所包圍而呈現(xiàn)淡黃色;子囊近球形,
8~
12 μ m ,一般在二周內(nèi)成熟,有的則不成熟;子囊孢子雙凸鏡形, 3. 5~5 μ m×3. 2~4 μ m ,具兩個(gè)完整的
赤道冠,具褶,寬約 0.
5~1 μ m ,紫紅色,凸面光滑。分生孢子頭初為球形至放射形,直徑 30~70 μ m ,老
后呈致密短柱形,
50~100 μ m×30~40 μ m ;分生孢子梗生自基質(zhì)或氣生菌絲,孢梗莖大多較短,( 20~ )
50~150 ( ~300 )
μ m×3.
5~6. 5 μ m ,稍彎曲,帶茶褐色,壁光滑;頂囊為半球形,顏色與孢梗莖相同,直徑
(
5. 5~ ) 8~16 μ m ,上半部表面可育;產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)雙層:梗基 4~8 μ m×2. 5~3 μ m ,有的異常菌株在頂囊上
形成肥大的近于球形的�；�,瓶梗 5~8 μ m×2~2.
5 μ m ;分生孢子球形( 2. 5~ ) 3~4 ( ~4. 5 )
μ m ,粗糙,
偶而近于光滑;殼細(xì)胞大多為球形,直徑 11 μ m~25 μ m ,少數(shù)稍長(zhǎng)或橢圓形 18~40 μ m×12~24 μ m ,
見圖 5 。
構(gòu)巢曲霉的某些菌株可產(chǎn)生雜色曲霉素。
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說明:
1 ———產(chǎn)孢結(jié)構(gòu);
2 ———分生孢子;
3 ———子囊孢子;
4 ———?dú)ぜ?xì)胞。
圖 5  構(gòu)巢裸胞殼的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)
6. 1. 5  赭曲霉( A . ochraceus )
菌落在查氏瓊脂上 25℃7d 直徑 25mm~35mm ,
10d~12d 達(dá) 35mm~55mm ;質(zhì)地絲絨狀或
稍現(xiàn)絮狀,平坦或具不明顯的輻射狀溝紋;分生孢子結(jié)構(gòu)稠密或較稀疏,淡黃褐色,近于鹿皮色至肉桂色
(
Chamois , R.XXX→Cinnamon , R.XXIX )或 黃 赭 色 ( Yellow Ocher , R.XV ),也 有 近 于 古 銅 色
(
Isabella , R.XXX )者,菌絲體白色;有時(shí)形成無色至褐色的滲出液;稍具霉味;有的菌株能形成菌核,單
獨(dú)或成群;菌落反面無色或呈不同程度的綠褐色至紫褐色。分生孢子頭初為球形 75 μ m~200 μ m ,老
后可達(dá) 500 μ m ,常 裂 開 成 幾 個(gè) 分 叉 的 致 密 柱 狀 體;分 生 孢 梗 大 多 生 自 基 質(zhì),孢 梗 莖 一 般 500~
1500 μ m× ( 6~ ) 10~15 μ m ,少數(shù)長(zhǎng)者可達(dá) 200 μ m 以上,多呈褐色,壁厚 0. 7~1. 5 μ m ,粗糙;頂囊球形
或近球形,(
20~ ) 30~45 ( ~55 )
μ m ,全部表面可育,偶有小頂囊存在,僅頂部可育;產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)雙層:�；�
(
7~ ) 10~25 μ m× ( 2. 5~ ) 3~6 μ m ,瓶梗 7~13 μ m×1. 5~3 μ m ;分生孢子多為球形或近球形,直徑
(
2~ ) 2. 5~3. 5 ( ~4 )
μ m ,少數(shù)寬橢圓形,
3~3. 5 μ m×2. 5~3 μ m ,壁近于光滑或細(xì)密粗糙。若有菌核則
為球形,卵形或稍長(zhǎng),
500 μ m~1000 μ m ,初為白色,后呈紫褐色,見圖 6 。
赭曲霉的某些菌株可產(chǎn)生赭曲霉毒素( Ochratoxins )。
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圖 6  赭曲霉的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)和分生孢子
6. 1. 6  黑曲霉 ( A . niger )
菌落在查氏瓊脂上生長(zhǎng)迅速,
25℃7d 直徑一般 50mm~70mm ,少數(shù)菌株較局限;平坦或中心稍
凸起,有規(guī)則或不規(guī)則的輻射狀溝紋;質(zhì)地絲絨狀或稍呈絮狀,有的菌株偶有不育性過度生長(zhǎng);分生孢子
結(jié)構(gòu)大量,表面呈暗褐黑色至炭黑色;滲出液有或無,無色;具或不具霉味;有的菌株產(chǎn)生菌核,在斜面培
養(yǎng)時(shí)多生于基部;菌落反面無色或呈不同程度的黃色、黃褐色或帶微黃綠色。分生孢子頭初為球形至輻
射形,直徑 150~500 μ m ,老后分裂成幾個(gè)圓柱狀結(jié)構(gòu),可達(dá) 800 μ m ;分生孢子梗發(fā)生于基質(zhì),孢梗莖
(
800 ) 1500~3500 ( ~4000 )
μ m×9~20 μ m ,壁光滑,老時(shí)帶黃色或黃褐色;頂囊球形或近球形,直徑
(
30~ ) 40~70 ( ~80 )
μ m ,老時(shí)褐色,全部表面可育;產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)雙層:�；�在一定時(shí)間范圍內(nèi)隨菌齡的增
大而增大,(
10~ ) 15~35 ( ~70 )
μ m× (
3~ ) 5~8 ( ~14 )
μ m ,老時(shí)暗褐色;瓶梗(
7~ ) 8~10 ( ~12 )
μ m×
(
2~ ) 2. 5~3 μ m ,分生孢子球形,近球形或老后橫向變扁,直徑 3~4. 8 ( ~5. 4 )
μ m ,壁明顯粗糙或具尖
疣、不規(guī)則的脊?fàn)钔黄鸹蚩v向條紋,偶有稍現(xiàn)粗糙或近于平滑者;如有菌核則為球形或近球形,直徑
700 μ m~1000 μ m ,或更大,奶油色至淡黃色,見圖 7 。
黑曲霉的某些菌株可產(chǎn)生 B 族伏馬菌素( FumonisinsB )。
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圖 7  黑曲霉的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)和分生孢子
6. 1. 7  炭黑曲霉 ( A . carbonarius )
菌落在查氏瓊脂上生長(zhǎng)迅速,
25℃7d 直徑一般 40mm~60mm ,平坦;質(zhì)地絲絨狀,有的菌株有
較多的氣生菌絲;分生孢子結(jié)構(gòu)大量,有時(shí)在邊緣處或近邊緣處較少,孢子頭純黑色;具少量無色滲出液
或無;稍具不明顯的霉味;菌落反面淡黃色至黃褐色或在中部呈黃褐至黑褐色。分生孢子頭初為球形,
直徑 100~300 ( ~500 )
μ m ,老時(shí)分裂成幾個(gè)圓柱狀結(jié)構(gòu),直徑可達(dá) 1000 μ m 或更大;分生孢子梗發(fā)生于
基質(zhì),孢梗莖 2000~4500×20~30 ( ~40 )
μ m ,無色透明,老時(shí)近頂囊部分帶黃色或淡褐色,壁平滑;頂
囊球形或近球形,直徑 70~80 ( ~120 )
μ m ,老時(shí)帶褐色,全部表面可育;產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)雙層:梗基在一定時(shí)間
范圍內(nèi)隨菌齡的增大而增大,通常 20~50
μ m× (
5~ ) 7~13 μ m ,大者可長(zhǎng)達(dá) 80 μ m ,老時(shí)呈褐色;瓶梗
8~12 ( ~15 )
μ m×3~6 ( ~8 ) μ m ;分生孢子球形,近球形,直徑 6 μ m~9 μ m ,壁顯著粗糙,老后呈尖疣狀
或疣狀,見圖 8 。文獻(xiàn)報(bào)道偶爾產(chǎn)生菌核。
炭黑曲霉的某些菌株可產(chǎn)生伏馬菌素和赭曲霉毒素。
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圖 8  炭黑曲霉的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)和分生孢子
6. 1. 8  棒曲霉 ( A . clavatus )
菌落在查氏瓊脂上 25℃7d 直徑 23mm~30mm ,
12d 達(dá) 30~38 ( ~60 ) mm ;質(zhì)地絲絨狀至粉粒
狀,有環(huán)形及輻射形溝紋;菌絲體白色,分生孢子結(jié)構(gòu)暗藍(lán)綠色,近于艾綠至百合綠色( ArtemesiaGreen
→LilyGreen , R.XLVII ),有時(shí)分生孢子區(qū)中心部分現(xiàn)土黃色;滲出液有或無,無色或淡褐色;無明顯氣
味,有的菌株則具強(qiáng)烈的腐臭;菌落反面無色或淡黃色。分生孢子頭幼時(shí)為棒形,長(zhǎng)度可達(dá) 300 μ m ,直
徑可達(dá) 150 μ m ,老后裂成幾個(gè)致密的圓柱體;分生孢子梗發(fā)生于基質(zhì),孢梗莖長(zhǎng)短不一,短者 300 μ m~
400 μ m ,長(zhǎng)者可達(dá) 3000 μ m ,直徑 20~30 ( ~50 )
μ m ,壁較薄,光滑無色;頂囊由孢梗莖頂端膨大逐漸成
為棍棒形,長(zhǎng)度可達(dá) 250 μ m ,直徑 50~60 ( ~100 )
μ m ;產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)單層:瓶梗密集著生于頂囊的全部表面,
一般為 8~12 μ m×2~3 μ m ,生于頂囊基部者較為短小;分生孢子為橢圓形, 3~4.
5 ( ~5 )
μ m ×2.
5~
3 μ m ,壁光滑;未見菌核及有性階段,見圖 9 。
棒曲霉的某些菌株可產(chǎn)生展青霉素(
Patulin )。
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說明:
1 ———分生孢子梗和分生孢子頭;
2 ———產(chǎn)孢結(jié)構(gòu);
3 ———分生孢子。
圖 9  棒曲霉的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)和分生孢子
6. 2  青霉屬 ( Penicillium )
本屬產(chǎn)毒真菌,主要包括橘青霉、橘灰青霉(異名:圓弧青霉 P . cyclopium )、灰黃青霉(異名:展青
霉 P .
patulum ,蕁麻青霉 P . urticae )、鮮綠青霉等(原名:純綠青霉 P .
viridicatum )。這些真菌可能產(chǎn)
生桔青霉素、圓弧偶氮酸、展青霉素等次生代謝產(chǎn)物。
菌絲細(xì),具橫隔,無色透明或色淡,有顏色者較少,更不會(huì)有暗色,展開并產(chǎn)生大量的不規(guī)則分枝,形
成不同致密程度的菌絲體;由菌絲體組成的菌落邊緣通常明確、整齊,很少有不規(guī)則者;分生孢子梗發(fā)生
于埋伏型菌絲、基質(zhì)表面菌絲或氣生菌絲;孢梗莖較細(xì),常具橫隔,某些種在其頂端呈現(xiàn)不同程度的膨
大,在頂部或頂端產(chǎn)生帚狀枝,壁平滑或呈現(xiàn)不同程度的粗糙;其中帚狀枝的形狀和復(fù)雜程度是鑒別分
類的首要標(biāo)準(zhǔn),帚狀枝有單輪生、雙輪生、三輪生、四輪生和不規(guī)則者;產(chǎn)細(xì)胞瓶梗相繼產(chǎn)生,彼此緊密、
不緊密或近于平行,瓶裝、披針形、圓柱狀和近圓柱狀者少,通常直而不彎,其頂端的梗頸明顯或不明顯;
分生孢子是向基的瓶梗孢子,單胞,小,球形、近球形、橢圓形、近橢圓形、卵形或有尖端、圓柱狀和近圓柱
狀者少,壁平滑、近于平滑、不同程度的粗糙,形成干鏈,使菌落表面形成不同程度顏色,如綠色、藍(lán)色、灰
色、橄欖色,褐色者少,顏色往往隨著菌齡的增加而變得較深或較暗。
6. 2. 1  橘青霉 ( P . citrinum )
菌落在查氏瓊脂上 25℃ 培養(yǎng) 12d ,直徑 20mm~30mm ;具少量或大量放射狀皺紋,或有幾道同
心環(huán)紋;質(zhì)地通常絨狀或中心帶絮狀;分生孢子結(jié)構(gòu)通常大量產(chǎn)生(偶遇營(yíng)養(yǎng)缺陷型分離物則生長(zhǎng)很稀
疏),分生孢子面通常呈現(xiàn)典型的藍(lán)綠色,也有灰綠色者,近于豆綠色、艾綠色至百合綠色(
peagreen ,
Artemisiagreen , Lilygreen , R.PI.XLVII )及淡灰橄欖綠色( lightgrayisholive , R.PI.XLVI );菌絲體
白色至黃色;通常有適量或大量的淡黃色、黃色的滲出液;反面橙黃色、黃褐色或帶紅褐色;可溶性色素
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淡黃褐色,黃色、偶有缺乏者。
分生孢子梗發(fā)生于基質(zhì),孢梗莖 80~250 ( ~300 )
μ m×2.
5~3. 2 μ m ,偶有少量發(fā)生于氣生菌絲者的
長(zhǎng)度通常小于 80 μ m ,壁平滑;帚狀枝雙輪生,偶有三輪生或單輪生;�；�每�� 3~5 個(gè), 8.0~16
( ~20 )
μ m×2.
2~3. 0 μ m ,同輪中的長(zhǎng)短通常相差較大,顯著叉開,頂端通常呈現(xiàn)囊狀膨大;瓶梗每輪
6~10 個(gè)或更多, 8. 0~9. 0 ( ~11 )
μ m×2.
0~2. 5 μ m ,瓶狀,梗頸短;分生孢子呈現(xiàn)球形或近球形,小,
2. 5~3. 2 μ m ,壁平滑或近于平滑;分生孢子鏈較疏松或是較緊密的圓柱狀,見圖 10 。
橘青霉的某些菌株可產(chǎn)生桔青霉素(
Citrinin )。
圖 10  橘青霉的分生孢子結(jié)構(gòu)和分生孢子
6. 2. 2  橘灰青霉 P . aurantiogriseum (異名:圓弧青霉 P . cyclopium )
菌落在查氏瓊脂上 25℃ 培養(yǎng) 12d ,直徑 42mm~55mm ;有少量的放射狀皺紋,同心環(huán)紋少或較
多,也有近于平坦者;質(zhì)地絨狀兼粉末狀或顆粒狀;分生孢子結(jié)構(gòu)大量產(chǎn)生,分生孢子面通常呈現(xiàn)典型的
藍(lán)綠色,近于豆綠色、艾綠色和百合綠色(
peagreen , Artimisiagreen , Lilygreen ,
R.PI.XLVII ),中心面
上往往是暗綠色或暗褐綠色,近于暗橄欖綠色(
duskyolive-green , R.PI.XLI )或紫杉綠色( Yewgreen ,
R.PI.XXXI );菌絲體白色;滲出液黃褐色、橘紅色,偶有缺乏者;反面黃褐色、紅褐色或紫褐色;可溶性
色素缺乏,偶有存在。
分生孢子梗發(fā)生于基質(zhì),孢梗莖(
150~ ) 200~400 ( ~500 )
μ m×3.
5~4. 5 μ m ,壁通常呈現(xiàn)小疣狀粗
糙,也有平滑者,這兩者可能出現(xiàn)于同一分離物中;帚狀枝三輪生,雙輪生者少,彼此通常緊貼;副枝 1~
2 ( ~3 )個(gè), 12~25 ( ~32 )
μ m×3.
2~3. 5 μ m ,壁顯著的小疣狀粗糙或平滑;�；�每��( 2~ ) 3~5 個(gè),
(
8. 0~ ) 10~15 μ m×2. 8~3. 2 μ m ,壁平滑;瓶梗每輪 5~7 個(gè), 8. 0~10 ( ~11 )
μ m×2.
2~2. 6 μ m ,瓶狀,
梗頸不明顯;分生孢子呈現(xiàn)球形、近球形至橢圓形,
3. 5~4. 2 μ m×2. 5~3. 5 μ m 或 3. 2~4. 0 μ m ,壁平滑;
分生孢子鏈呈現(xiàn)叉開的圓柱狀或疏松而不規(guī)則,見圖 11 。
橘灰青霉的代謝產(chǎn)物為圓弧偶氮酸。
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圖 11  橘灰青霉的分生孢子結(jié)構(gòu)和分生孢子
6. 2. 3  灰黃青霉 P . griseofulvum (異名:展青霉 P . patulum ,蕁麻青霉 P . urticae )
菌落在查氏瓊脂上 25℃ 培養(yǎng) 12d ,直徑 20mm~28mm ;通常產(chǎn)生大量的放射狀皺紋或中心有臍
狀突起而中部面上有不太明顯的同心環(huán)紋;質(zhì)地通常絨狀,帶輕微絮狀,在邊緣面上的顆粒狀通常更為
突出;分生孢子結(jié)構(gòu)通常大量產(chǎn)生或較少,分生孢子面灰藍(lán)綠色或藍(lán)綠色,近于淡灰橄欖色(
light
grayisholive , R.PI.XL.VI )、豆綠色(
peagreen , R.PI.XLVII );菌絲體,邊緣通常呈現(xiàn)白色,而中部面
上往往呈現(xiàn)淡黃色至紫褐色;滲出液通常大量產(chǎn)生,帶紅褐色或黃褐色,偶有缺乏者;反面黃褐色、橘褐
色或紅褐色;可溶性色素類似較淡的反面顏色。
分生孢子梗發(fā)生于基質(zhì)或在孢梗束和束絲之中,孢梗莖 250~400 ( ~650 )
μ m×3.
2~4. 0 ( ~4. 5 )
μ m ,壁平滑;帚狀枝比較復(fù)雜,多是四輪生,三輪生者相對(duì)較少,叉開,其分枝點(diǎn)通常 2~3 個(gè)或更多,且
顯得分散;副枝通常 2~3 個(gè),可達(dá) 4~5 個(gè),
16~30 ( ~40 )
μ m×3.
0~3. 5 ( ~4. 0 )
μ m ;類副枝通常 2 個(gè),
偶有 3 個(gè),
8. 0~18 μ m×3. 0~3. 5 μ m ;�；�每�� 2~4 個(gè), 8. 0~11 μ m×2. 8~3. 5 μ m ,頂端通常膨大;瓶
梗每輪 5~7 個(gè),
5. 0~6. 5 ( ~7. 5 )
μ m×2.
0~2. 5 μ m ,瓶狀,短,梗頸也短;分生孢子呈現(xiàn)近球形或?qū)挋E圓
形,
2. 8~3. 5 μ m×2. 2~3. 0 μ m ,壁光滑,分生孢子鏈呈現(xiàn)較緊密而叉開的圓柱狀或近圓柱狀,見圖 12 。
灰黃青霉的某些菌株產(chǎn)生展青霉素。
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圖 12  灰黃青霉的分生孢子結(jié)構(gòu)和分生孢子
6. 2. 4  鮮綠青霉 P . viridicatum (原名:純綠青霉 P . viridicatum )
菌落在查氏瓊脂上 25℃ 培養(yǎng) 12d ,直徑 27mm~35mm ;有少量放射狀皺紋或幾道同心環(huán)紋,偶
有近于平坦者;質(zhì)地絨狀兼顆粒狀;分生孢子結(jié)構(gòu)在菌落邊緣或近邊緣大量產(chǎn)生,分生孢子面黃綠色,近
于林肯綠色、阿月渾子綠色(
Lincolngreen , Pistachiogreen , R.PI.XLI )、孔雀石綠色( malachitegreen ,
R.. PL.XXXII );菌絲體白色,中部面往往呈現(xiàn)微黃白色或淡褐色;滲出液淡黃淺褐色或缺乏;反面黃色
或黃紅褐色;可溶性色素類似較淡的反面顏色或缺乏。
分生孢子梗發(fā)生于基質(zhì),孢梗莖 150~300 ( ~450 )
μ m×35~4.
5 μ m ,壁顯著的疣狀粗糙;帚狀枝三
輪生,偶有雙輪生或四輪生,彼此緊貼或較緊貼;副枝 1~2 個(gè), 14~25 ( ~35 )
μ m×3.
2~4. 0 μ m ;壁顯著
疣狀粗糙;�；�每�� 2~5 個(gè),
8. 0~14 ( ~16 )
μ m×3.
0~3. 5 μ m ,壁通常疣狀粗糙,頂端通常膨大;瓶梗每
輪 5~8 個(gè),
7. 0~11 μ m×2. 2~2. 8 μ m ,瓶狀,梗頸短;分生孢子呈現(xiàn)球形或近球形, 3. 2~4. 0 ( ~4. 5 )
μ m ,壁平滑;分生孢子鏈不規(guī)則或近于圓柱狀,見圖 13 。
鮮綠青霉的某些菌株可產(chǎn)生赭曲霉毒素和桔青霉素。
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圖 13  鮮綠青霉的分生孢子結(jié)構(gòu)和分生孢子
6. 3  鐮刀菌屬 ( Fusarium )
本屬的產(chǎn)毒真菌主要包括禾谷鐮刀菌、串珠鐮刀菌、雪腐鐮刀菌、三線鐮刀菌、梨孢鐮刀菌、擬枝孢
鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、茄病鐮刀菌和木賊鐮刀菌等。這些真菌可能產(chǎn)生單端孢霉烯族化合物( Trichoth-
ecenes )、玉米赤霉烯酮( Zearalenone ,簡(jiǎn)稱 ZEN )、串珠鐮刀菌素( Moniliformin )和丁烯酸內(nèi)酯( Butenol-
ide )等次生代謝產(chǎn)物。
在馬鈴薯 - 葡萄糖瓊脂或查氏培養(yǎng)基上氣生菌絲發(fā)達(dá),高 0.5cm~1.0cm 或較低為 0.3cm~
0. 5cm ,或更低為 0. 1cm~0. 2cm ;氣生菌絲稀疏,有的甚至完全無氣生菌絲而由基質(zhì)菌絲直接生出粘
孢層,內(nèi)含大量的分生孢子。大多數(shù)種小型分生孢子通常假頭狀著生,較少為鏈狀著生,或者假頭狀和
鏈狀著生兼有。小型分生孢子生于分枝或不分枝的分生子梗上,形狀多樣,有卵形、梨形、橢圓形、長(zhǎng)橢
圓形、紡錘形、披針形、臘腸形、柱形、錐形、逗點(diǎn)形、圓形等。 1~2 (
3 )隔,通常小型分生孢子的量較大型
分生孢子為多。大型分生孢子產(chǎn)生在菌絲的短小爪狀突起上或產(chǎn)生在分生孢子座上,或產(chǎn)生在粘孢團(tuán)
中;大型分生孢子形態(tài)多樣,鐮刀形、線形、紡錘形、披針形、柱形、臘腸形、蠕蟲形、鰻魚形,彎曲、直或近
于直。頂端細(xì)胞形態(tài)多樣,有短喙形、錐形、鉤形、線形、柱形,逐漸變窄細(xì)或突然收縮。氣生菌絲、子座、
粘孢團(tuán)、菌核可呈各種顏色,基質(zhì)亦可被染成各種顏色。厚垣孢子間生或頂生,單生或多個(gè)成串或成結(jié)
節(jié)狀,有時(shí)也生于大型分生孢子的孢室中,無色或具有各種顏色,光滑或粗糙。
鐮刀菌屬的一些種,初次分離時(shí)只產(chǎn)生菌絲體,常常還需誘發(fā)產(chǎn)生正常的大型分生孢子以供鑒定。
因此須同時(shí)接種無糖馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基或查氏培養(yǎng)基等。
6. 3. 1  串珠鐮刀菌( F . moniliforme )
菌株在馬鈴薯 - 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上氣生菌絲棉絮狀,蒼白 ~ 粉紅色至淡紫色,米飯培養(yǎng)基上呈玫
瑰、紫紅乃至藍(lán)色或它們之間的顏色,粘孢團(tuán)粉紅色、粉紅 ~ 肉桂色乃至暗藍(lán)色。瓶狀小梗較細(xì)長(zhǎng),
20~
30 μ m×2~3 μ m 。小型分生孢子鏈狀或假頭狀著生,橢圓形、紡錘形、卵形、梨形、臘腸形,透明,單細(xì)胞
或有一隔,直或稍彎,
3~7 ( ~14 )
μ m×2~3 ( ~4.
8 )
μ m 。大型分生孢子錐形、鐮刀形、紡錘形、紡錘 ~ 鐮
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刀形、線形,頂端逐漸窄細(xì)或粗細(xì)均一,或一端較鈍而另一端較銳,透明,壁薄,腳胞明顯或楔形,
3~6 ( ~
7 )隔,見圖 14 。
3~4 隔:( 25 μ m~36 μ m ) × ( 2. 5 μ m~3. 5 μ m );
5~6 隔:( 30 μ m~50 μ m ) × ( 2. 5 μ m~4 μ m );
7 隔: 40~60 ( ~14 )
μ m×3~4.
8 μ m 。
無厚垣孢子,有子座及菌核,呈黃、褐或紫色。
子囊階段:藤倉(cāng)赤霉(
Gibberellafujikuroi )。
子囊殼深藍(lán)色,球形、卵形或圓錐形,外壁具疣狀突起,(
250 μ m~330 μ m ) × ( 220 μ m~280 μ m ),
子囊圓筒形 ~ 臘腸形,含 4~8 個(gè)子囊孢子,子囊孢子橢圓形, 1 隔,( 14 μ m~18 μ m ) × ( 4.4 μ m~
7 μ m )。
串珠鐮刀菌主要分布在水稻上,還可在玉蜀黍、甘蔗及橘柑、棉、洋蔥等植物的根、莖、穗、種子及土
壤中,能產(chǎn)生串珠鐮刀菌素和玉米赤霉烯酮等。
說明:
A ———子囊孢子;
B ———小型分生孢子和分生孢子梗;
C ———大型分生孢子和分生孢子梗。
圖 14  串珠鐮刀菌(藤倉(cāng)赤霉)
6. 3. 2  禾谷鐮刀菌 ( F . graminearum )
禾谷鐮刀菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)快,
4d 后菌落平均直徑 8. 9cm ,生長(zhǎng)旺盛,菌絲棉
絮狀至絲狀,白色、淡玫瑰色、白 ~ 洋紅色,中央有時(shí)有黃色氣生菌絲區(qū)。反面深洋紅色或淡磚紅 - 赭色。
通常野生菌株不產(chǎn)孢子,在加 3% 食鹽的查氏培養(yǎng)液或麥粒煎汁培養(yǎng)基深層震蕩培養(yǎng) 4d~5d 時(shí)可產(chǎn)
生大型分生孢子。大型分生孢子近鐮刀形、紡錘形、披針形,橢圓形彎曲或近于直,頂端逐漸變細(xì),頂端
細(xì)胞較細(xì)長(zhǎng),腳胞通常明顯或楔狀,大多數(shù) 3~5 隔,極少數(shù) 1~2 隔或 6~9 隔,無色,聚集時(shí)淺紅色,單
個(gè)孢子無色,聚集時(shí)呈淺粉紅色,見圖 15 。
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大型分生孢子量度 3~4 隔 25~40 μ m×2. 5~4 μ m
5~7 隔 48~50×3~3. 5 μ m (變幅 35~62×2. 5~5 μ m )
在馬鈴薯 - 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上通常無厚垣孢子,但在菌絲中可見膨大細(xì)胞。膨大細(xì)胞球形或卵
形,單個(gè)或成串頂生或間生,壁薄,透明,直徑 6~12 ( ~14 )
μ m 。
有些菌株在馬鈴薯塊或米飯上產(chǎn)生菌核和子座。本種無小型分生孢子,一般不產(chǎn)厚垣孢子,如有也
極少,間生。子囊殼散生或聚集,在受害植物組織上產(chǎn)生。
子囊階段:玉米赤霉(
Gibberellazeae )。
禾谷鐮刀菌是赤霉病麥的主要病原菌,主要引起小麥、大麥和元麥的赤霉病,禾谷鐮刀菌還可以感
染玉米和水稻等,能產(chǎn)生脫氧雪腐鐮刀菌烯醇( Deoxynivalenol ,簡(jiǎn)稱 DON ))、玉米赤霉烯酮(
ZEN )和
T-2 毒素( T-2toxin )等。
說明:
A ———寄主上的子囊和子囊孢子;
B ———培養(yǎng)中的子囊孢子;
C ———分生孢子和分生孢子梗。
圖 15  禾谷鐮刀菌(玉米赤霉)
6. 3. 3  梨孢鐮刀菌 ( F . poae )
梨孢鐮刀菌在馬鈴薯 - 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)快,呈洋紅色、蒼白 ~ 玫瑰色、玫瑰 ~ 洋紅色洋紅 ~
赭色,反面呈深淺不同的洋紅色或淺紫洋紅色,蛛絲狀、絲狀,有時(shí)帶粉狀。小型分生孢子生于桶狀的瓶
狀小梗上,假頭著生,瓶狀小梗 15~2 μ m×2.
5 μ m 。小型分生孢子主要呈球形和梨形,其次為檸檬形、
倒卵形、橢圓形、窄瓜子形,
0~1 隔,透明,球形孢子直徑 4~8 ( 10 )
μ m ,其他形狀的小型分生孢子 8~20
(
26 )
μ m×2.
5~8 ( 9 )
μ m 。
大型分生孢子近鐮刀形、紡錘 ~ 披針形,彎度稍大,上半部稍寬,頂端細(xì)胞短鈍,腳胞有或無,培養(yǎng)時(shí)
常見 1~3 隔孢子,
3 隔: 17~44 μ m×3~5 μ m 。
厚垣孢子生于菌絲中,矩圓形至橢圓或似橢圓形,多數(shù)間生,少數(shù)頂生、單生或數(shù)個(gè)成串,或結(jié)節(jié)狀,
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赭黃色,見圖 16 。
梨孢鐮刀菌主要寄生于谷類,可產(chǎn)生 T-2 毒素、 HT-2 毒素、新茄病鐮刀菌烯醇和丁烯酸內(nèi)酯等。
圖 16  梨孢鐮刀菌的小型和大型分生孢子梗及小型和大型分生孢子
6. 3. 4  三線鐮刀菌( F . tricinctum )
三線鐮刀菌與梨孢鐮刀菌非常近似,只是在下述幾點(diǎn)上有區(qū)別:
a ) 小型分生孢子以卵形、窄瓜子形、梨形的孢子居多,球形較少;
b ) 瓶狀小梗船形至筒形居多,桶形較少;
c ) 大型分生孢子易見 3 隔以上的孢子,見圖 17 。
3 隔: 26~38 μ m×3~4. 7 μ m ;
5 隔: 34~53 μ m×3~4. 8 μ m 。
厚垣孢子呈球形,壁光滑,間生、單生或成串。
本菌主要寄生于玉米和小麥的種子上,可產(chǎn)生 T-2 毒素、丁烯酸內(nèi)酯、二乙酸藨草鐮刀菌烯醇( Di-
acetoxyscirpenol ,簡(jiǎn)稱 DAS )和玉米赤霉烯酮。
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圖 17  三線鐮刀菌的分生孢子和分生孢子梗
6. 3. 5  雪腐鐮刀菌 ( F . nivale )
雪腐鐮刀菌在馬鈴薯 - 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上菌落白色、淺桃色、粉紅色至杏黃色,培養(yǎng)基(基質(zhì))稍呈
淺黃色,菌絲呈稀疏棉絮狀、蛛絲狀,生長(zhǎng)速度為 4d 后平均菌落直徑超過 1cm 。在 4℃ 發(fā)育良好,培養(yǎng)
7d~10d 可見分生孢子,分生孢子直接產(chǎn)生于氣生菌絲中,但在某些菌株中,分生孢子可自小的分生孢
子梗座上生出,粘孢團(tuán)呈鮭橙色、淺橙色,干時(shí)肉桂褐色,菌絲直徑 1.
5~5 μ m ,瓶狀小梗 7~9 μ m×
2. 5~3 μ m ,分生孢子紡錘 ~ 鐮刀形至香腸形,彎曲,兩端漸變窄,末端鈍圓,無腳胞,有時(shí)基部稍呈楔形,
(
0 ) 1~3 ( 5 )隔,( 5 ) 7~30 ( 35 )
μ m× (
2 ) 2. 5~4. 0 ( 5. 0 )
μ m ,。厚垣孢子缺,子座小,透明,粉紅至磚紅,后
期革褐色。
子囊殼埋生于罹病植株近莖基部葉的表皮下,外表呈小黑點(diǎn)狀,無子座,切片觀察,子囊殼呈卵形至
球形,頂端乳頭狀,透明,貫穿表皮但不隆起,
120~180 μ m , ×100~150 μ m 。子囊殼壁厚 14~20 μ m ,
由兩層組成,外壁由 4~5 層長(zhǎng)形至球形細(xì)胞組成,
5~7 μ m , ×2. 5~3 μ m ,具淺色素。內(nèi)壁由數(shù)層薄壁
細(xì)胞所組成。子囊棍棒形,偶爾圓柱形,薄壁 60~70 μ m×6~7 μ m ,含 6~8 個(gè)子囊孢子,子囊孢子橢圓
形,中央有一個(gè)隔膜,但后期在兩側(cè)可再各生一個(gè)隔膜,
10~17 μ m×3. 5~4. 5 μ m ,見圖 18 。
本菌無厚垣孢子,子座小,透明,呈粉紅至磚紅色,后期變?yōu)楦锖稚��?br /> 子囊階段:雪腐小赤殼( MicronectriellaMivalis )。
雪腐鐮刀菌主要分布在水稻上,還可在玉蜀黍、甘蔗及橘柑、棉、洋蔥等植物的根、莖、穗、種子及土
壤中,滅菌秸稈上低于 18℃ 培養(yǎng) 10d~15d ,子囊殼生長(zhǎng)茂盛,可產(chǎn)生鐮刀菌烯酮 -X 、雪腐鐮刀菌烯醇
和二乙酸雪腐鐮刀菌烯醇等有毒代謝產(chǎn)物。
GB4789. 16 — 2016
19
說明:
A ———子囊和子囊孢子;
B ———分生孢子和分生孢子梗。
圖 18  雪腐鐮刀菌(雪腐小赤殼)
6. 3. 6  擬枝孢鐮刀菌 ( F . sporotricoides )
擬枝孢鐮刀菌在馬鈴薯 - 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度較快( 4d 后菌落平均直徑 3.
5cm ),氣生菌
絲蛛絲狀,下部櫻桃紅鉛紅,表面白色至淺玫瑰色,菌落反面鉛紅色,瓊脂本身無色。小型分生孢子生于
氣生菌絲的多芽產(chǎn)孢及簡(jiǎn)單的瓶狀小梗上,簡(jiǎn)單瓶形小梗筒形,
12~17 μ m×2. 5~3 μ m ,見圖 19 。
小型分生孢子橢圓形、紡錘形或倒卵形,
0~1 隔, 7~10 μ m×3~5 μ m 。
大型分生孢子生于茂盛分枝的分生孢子梗上或分生孢子梗座上,瓶狀小梗 12~25 μ m×2.
5~3 μ m 。
大型分生孢子鐮刀形、紡錘 ~ 鐮刀形、披針形,彎曲,無腳胞或楔形,
3~5 隔, 24~48 μ m×3. 5~5 μ m 。
厚垣孢子間生于菌絲中,單生或成串,球形,壁光滑,透明,成熟時(shí)變?yōu)榈�褐�?直徑 10~15 μ m 。
本菌主要寄生于禾谷類、蔬菜及雜草的種子及土壤中,能產(chǎn)生 T-2 毒素、 HT-2 毒素、丁烯酸內(nèi)酯和
新茄病鐮刀菌烯醇。
GB4789. 16 — 2016
20
說明:
A ———小型分生孢子和分生孢子梗;
B ———大型分生孢子和分生孢子梗。
圖 19  擬枝孢鐮刀菌
6. 3. 7  木賊鐮刀菌 ( F . equiseti )
本菌生長(zhǎng)速度快(
4d 后菌落直徑平均 5. 8cm ),在馬鈴薯 - 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上氣生菌絲棉絮狀,白
色、乳黃至褐色,米飯培養(yǎng)基上肉桂色。缺乏真正的小型分子孢子,大型分生孢子產(chǎn)生在近似帚狀分枝
的分生孢梗上或產(chǎn)生在氣生菌絲單生的側(cè)生瓶裝小梗上,(
10 ) 12~17 μ m× ( 2. 5 ) 3~4 μ m 。大型分生孢
子紡錘 -~ 鐮刀形、弧弓形、披針形,鰻狀彎曲、拋物線彎曲、雙曲線彎曲或近于直,中央細(xì)胞明顯膨大,頂
端細(xì)胞常窄細(xì)成長(zhǎng)刺或線狀,腳細(xì)胞明顯,
3~7 隔,見圖 20 。
3 隔: 22~45 μ m×3. 5~5 μ m ;
5 隔: 40~58 μ m×3. 7~5 μ m ;
7 隔: 42~60 μ m×4~5. 9 μ m 。
厚垣孢子間生于菌絲中,單獨(dú)、成鏈或結(jié)節(jié)狀,有極粗的疣狀突起或光滑,黃褐色或透明,單個(gè)厚垣
孢子直徑 6~10 μ m 。
子囊階段:錯(cuò)綜赤霉(
Gibberellaintricans )。
子囊殼單生或聚集,卵形,外壁疣瘤狀,
200~350 μ m×180~240 μ m ,子囊棍棒形,含 4~8 個(gè)單行
或雙斜行排列的子囊孢子,子囊孢子 3 隔,少數(shù) 1~2 隔,透明,紡錘形,
21~33 μ m×4~4. 5 μ m 。
本菌廣泛分布于許多植物(禾谷類、豆類、藥用植物、油料植物等)的根、莖基、果實(shí)、種子和土壤中,
可造成植物枯萎病及根腐,能產(chǎn)生二醋酸藨草鐮刀菌烯醇( DAS )、玉米赤霉烯酮、新茄病鐮刀菌烯醇和
丁烯酸內(nèi)酯。
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圖 20  木賊鐮刀菌(錯(cuò)綜赤霉)的分生孢子、分生孢子梗和厚垣孢子
6. 3. 8  茄病鐮刀菌( F . solani )
本菌在馬鈴薯 - 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度快( 3.
2cm ),氣生菌絲生長(zhǎng)良好,棉絮狀或茸毛狀,灰
白色至蒼白淺黃色,瓊脂常有藍(lán)色至藍(lán)褐色或淺褐葡酒色或淺褐暗藍(lán)色。粘孢團(tuán)有或無,如有則呈白、
褐、黃、綠、藍(lán)或它們之間的顏色。小型分生孢子假頭狀著生,瓶裝小梗筒形,
40~80×2. 5~3 μ m 。小型
分生孢子橢圓形,卵圓形,長(zhǎng)橢圓形,
0~1 隔,光滑, 4~15×3~5 μ m (變化幅度 3~19×2~6 μ m )。大
型分生孢子紡錘 ~ 鐮刀形,紡錘 ~ 柱形或近鐮刀形,稍彎或直,很大距離的長(zhǎng)度上直徑相等,上部第 2~
3 個(gè)細(xì)胞最亮,頂端細(xì)胞短,稍窄細(xì)或變鈍,腳胞明顯或無,壁相當(dāng)厚, 2~5 ( ~8 )隔。
3 隔: 17~44 μ m ( ~52 ) ×4~5 ( ~7 )
μ m ;
4~5 隔: 35~55 μ m ( ~60 ) ×4. 5~6. 5 ( ~7 )
μ m ;
6~7 隔: 45~65 μ m ( ~70 ) ×5~6. 5 ( ~7. 2 )
μ m 。
厚垣孢子頂生或間生,單生或雙細(xì)胞,光滑或具小疣狀突起,單細(xì)胞的厚垣孢子圓形或短圓形,直徑
約 7~14 ( ~16 )
μ m 。
米飯及馬鈴薯塊上子座微白 ~ 黃色、微白 ~ 赭色、奶油黃色,暗藍(lán)色、淺紫肉桂色、赭 ~ 肉桂色,菌核
有或無。
子囊殼在寄主植物上稀疏至密聚,通常著生在假薄壁組織的子座墊上,不規(guī)則球形,具疣狀突起,淺
橙色至棕色或最后淺褐色,直徑 130~200 μ m ( 110~250 μ m ),子囊筒形 ~ 棍棒性,頂端鈍圓,具一孔
口,
60~80 μ m×8~12 μ m ,含 8 隔子囊孢子,子囊孢子橢圓形至倒卵形,中央有一隔,隔膜處稍溢縮,透
明,后變淺褐色,壁具縱條紋,
11~18 μ m×4~7 μ m (平均 12. 5×5. 5 μ m ),見圖 21 。
子囊階段:紅球叢赤殼( Nectriahaematocococa )。
茄病鐮刀菌可自許多罹病植物的根莖、果實(shí)及種子分離到,能產(chǎn)生新茄病鐮刀菌烯醇和玉米赤霉
烯酮。
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說明:
A ———子囊和子囊孢子;
B ———分生孢子和分生孢子梗。
圖 21  茄病鐮刀菌(紅球赤殼)
6. 3. 9  尖孢鐮刀菌( F . oxysporum )
菌株在馬鈴薯 - 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上蒼白、鮭色、粉紅色、淡葡酒色、紫色、蒼白 ~ 板石色,菌絲細(xì)毛
狀、茸毛狀至棉毛狀,有時(shí)幾乎不發(fā)達(dá),僅有貼伏狀菌絲繩狀細(xì)絲蔓延。菌落粘質(zhì),子座白色、粉紅色、橙
色、紫紅色。小型分生孢子假頭狀著生,
0~1 隔,卵形至臘腸形,生于側(cè)生的瓶狀小梗上。大型分生孢
子鐮刀形、線形、矛形紡錘 ~ 錐形至紡錘 ~ 鐮刀形,較窄、壁薄,末端直、稍彎或成喙?fàn)?腳胞有或呈楔狀,
厚垣孢子通常多,頂生或間生,單生或成鏈。子座突起經(jīng)常形成有類似赤霉屬(
Gibberella )的子囊殼,但
未報(bào)告有子囊或子囊孢子,通常認(rèn)為本組的子囊階段未明。
小型分生孢子:
6~14 μ m×2~3 ( 4~18×1. 8~3. 5 )
μ m ;
大型分生孢子:
3 隔 23~45 μ m×2. 5~3. 5 ( 16~50×2~4. 5 )
μ m ;
5 隔 30~40 μ m×3~4 ( 22~50×2. 2~4. 8 )
μ m ;
6~7 隔 50~55 μ m×3~4 ( 45~60×2. 2~4. 8 )
μ m 。
菌絲中的厚垣孢子頂生或間生,單細(xì)胞或雙細(xì)胞,光滑或粗糙或有疣狀突起,單細(xì)胞的厚垣孢子圓
形或矩圓形,直徑約 5 μ m~13 μ m ( ~16 )
μ m
,見圖 22 。
尖孢鐮刀菌可寄生于玉米、小麥和大麥的種子上,可產(chǎn)生玉米赤霉烯酮和 T-2 毒素。
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圖 22  尖孢鐮刀菌的分生孢子、分生孢子梗和厚垣孢子
6. 4  木霉屬( Trichoderma )
木霉生長(zhǎng)迅速,菌落棉絮狀或致密叢束狀,產(chǎn)孢叢束區(qū)常排列成同心輪紋,菌落表面顏色為不同程
度的綠色,有些菌株由于產(chǎn)孢不良幾乎呈白色。菌落反面無色或有色,氣味有或無,菌絲透明,有隔,分
枝繁復(fù)。厚垣孢子有或無,間生于菌絲中或頂生于菌絲短側(cè)分枝上,球形、橢圓形、無色,壁光滑。分生
孢子梗為菌絲的短側(cè)枝,其上對(duì)生或互生分枝,分枝上又可繼續(xù)分枝,形成二級(jí)、三級(jí)分枝,終而形成似
松柏式的分枝輪廓,分枝角度為銳角或幾乎直角,束生、對(duì)生、互生或單生瓶狀小梗。分枝的末端即為小
梗,但有的菌株主梗的末端為一鞭狀而彎曲不孕菌絲。分生孢子由小梗相繼生出靠粘液將其聚成球形
或近球形的孢子頭,有時(shí)幾個(gè)孢子頭匯成一個(gè)大的孢子頭。分生孢子近球形或橢圓形、圓筒形、倒卵形
等,壁光滑或粗糙,透明或亮黃綠色,見圖 23 。
木霉屬中里氏木霉(
T . reesei )和綠色木霉( T . viride )的一些菌株產(chǎn)生木霉素,屬于單端孢霉烯族化
合物。
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圖 23  木霉的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)
6. 5  頭孢霉屬 ( Cephalosporium )
在合成培養(yǎng)基及馬鈴薯 - 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上各個(gè)種的菌落類型不一,有些種缺乏氣生菌絲,濕潤(rùn)
或呈細(xì)菌狀菌落,有些種氣生菌絲發(fā)達(dá),呈茸毛狀或絮狀菌落,或有明顯的繩狀菌絲索或孢梗束。菌落
的色澤可由粉紅至深紅,白、灰色或黃色。營(yíng)養(yǎng)菌絲有隔,分枝,無色或鮮色或者在少數(shù)情況下由于盛產(chǎn)
厚垣孢子而呈暗色。菌絲常繞結(jié)成繩狀或孢梗束。分生孢子梗很短,大多數(shù)從氣生菌絲上生出,基部稍
膨大,呈瓶狀結(jié)構(gòu),互生、對(duì)生或輪生。分生孢子從瓶狀小梗頂端溢出后推至側(cè)旁,靠粘液把它們粘成假
頭狀,遇水即散開,成熟的孢子近圓形、卵形、橢圓形或圓柱形,單細(xì)胞或偶爾有一隔,透明,見圖 24 。有
些種具有性階段可形成子囊殼。
頭孢霉屬的某些菌株能引起芹菜、大豆和甘蔗等的植物病害,它所產(chǎn)生的毒素屬于單端孢霉烯族化
合物。
圖 24  頭孢霉的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)
6. 6  單端孢霉屬 ( Trichothecium )
本屬菌落薄,絮狀蔓延,分生孢子梗直立,有隔,不分枝。分生孢子 2 室 ~4 室,透明或淡粉紅色。
分生孢子是以向基式連續(xù)形成的形式產(chǎn)生,孢子靠著生痕彼此連接成串,分生孢子梨形或倒卵形,兩胞
室的孢子上胞室較大,下胞室基端明顯收縮變細(xì),著生痕在基端或其一側(cè),見圖 25 。
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該屬的某些菌株能產(chǎn)生單端孢霉素,屬于單端孢霉烯族化合物。
說明:
1 ———分生孢子與孢子的形成順序;
2 ———分生孢梗的第一個(gè)孢子的形成;
3 ———脫落的第一個(gè)分生孢子( S 處指著生臍);
4 ———后來形成的(非第一個(gè))分生孢子, T 處指與隔鄰孢子相接觸處的加厚部。
圖 25  單端孢霉的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)
6. 7  葡萄穗霉屬 ( Stachybotrys )
葡萄穗霉菌絲匍匐、蔓延,有隔,分枝,透明或稍有色。分生孢子梗從菌絲直立生出,最初透明然后
煙褐色,規(guī)則地互生分枝或不規(guī)則分枝,每個(gè)分枝的末端生瓶狀小梗,透明或淺褐色,在分枝末端單生、
兩個(gè)對(duì)生至數(shù)個(gè)輪生。分生孢子單個(gè)地生在瓶狀小梗的末端,橢圓形、近柱形或卵形,暗褐色,有刺狀突
起,見圖 26 。
該屬的某些菌株產(chǎn)生黑葡萄穗霉毒素,屬于單端孢霉烯族化合物。
圖 26  葡萄穗霉的分生孢子頭
6. 8  交鏈孢霉屬 ( Alternaria )
交鏈孢霉的不育菌絲匍匐,分隔。分生孢子梗,通常比菌絲粗而色深,直立單生或成簇,大多不分
枝,較短。分生孢子倒棍形、卵形、倒梨形、橢圓形或近圓柱形,基部鈍圓,頂端延長(zhǎng)成喙?fàn)?淡褐色,有壁
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26
磚狀分隔,暗褐色,成鏈生長(zhǎng),孢子形態(tài)及大小極不規(guī)律,見圖 27 。
該屬的某些菌株能產(chǎn)生交鏈孢酚( Alternariol ,簡(jiǎn)稱 AOH )、交鏈孢酚單甲醚(
alternariolmethyle-
ther , AME )和細(xì)交鏈孢菌酮酸( tenuazonicacid , TeA )等多種真菌毒素。
圖 27  交鏈孢霉的分生孢子梗和分子孢子鏈
6. 9  節(jié)菱孢屬 ( Arthrinium )
在馬鈴薯 - 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上,菌落生長(zhǎng)蔓延,
5d~6d 直徑達(dá) 9cm ,白色或略帶黃色絮狀,背面
(基質(zhì)菌絲)微黃至深褐。有的菌落中間呈褐色,背面黑褐色,有的菌落帶粉紅色,有的菌絲較稀疏,并具
有大量黑色孢子團(tuán)。分生孢子梗從母細(xì)胞垂直于菌絲而生出,分生孢子頂生或側(cè)生。孢子褐色,光滑,
雙凸鏡形、正面直徑 6.
8 μ m~13. 3 μ m ,側(cè)面厚度 4. 0 μ m~10. 0 μ m ,有的菌株具有臘腸形孢子,褐色、光
滑、大小為(
10. 6 μ m~14. 7 μ m ) × ( 4. 0 μ m~5. 3 μ m ),見圖 28 。
該屬的甘蔗節(jié)菱孢(
A . saccharicola )和蔗生節(jié)菱孢( A . phaeospermum )中的一些菌株能產(chǎn)生 3- 硝
基丙酸。
圖 28  節(jié)菱孢的分生孢子
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6. 10  紅曲菌屬( Monascus )
紅曲菌在麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好,菌落初為白色,老熟后變?yōu)榈�粉��、紫紅色或灰黑色,因種
而異。通常這類菌都能形成紅色色素,甚至分泌到培養(yǎng)基中。菌絲具橫隔,多核,分枝甚繁,且不規(guī)律。
細(xì)胞幼時(shí)含顆粒,老后含空泡及油滴,菌絲體不產(chǎn)生與營(yíng)養(yǎng)菌絲有區(qū)別的分生孢子梗。分生孢子著生在
菌絲及其分枝的頂端,單生或以向基式生出,
2 個(gè) ~6 個(gè)成鏈。閉囊殼球形,有柄,柄長(zhǎng)短不一。閉囊殼
內(nèi)散生十多個(gè)子囊,子囊球形,含 8 個(gè)子囊孢子,成熟后子囊壁解體,孢子剩留在薄壁的閉囊殼內(nèi),見
圖 29 。
紅曲菌的某些菌株可產(chǎn)生桔青霉素。
說明:
1 ———雄器;
2 ———產(chǎn)囊體;
3 ———閉囊殼。
圖 29  紅曲屬
7  結(jié)果與報(bào)告
根據(jù)菌落形態(tài)及鏡檢結(jié)果,參照上述各種真菌的形態(tài)描述,確定菌種名稱,報(bào)告真菌菌種鑒定結(jié)果。
8  其他
該標(biāo)準(zhǔn)中涉及的實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。
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附 錄 A
培養(yǎng)基和試劑
A. 1  乳酸苯酚液
A. 1. 1  成分
苯酚(純結(jié)晶)
10g
乳酸
10g
甘油
20g
蒸餾水
10mL
A. 1. 2  制法
將苯酚置水浴中至結(jié)晶液化后加入乳酸、甘油和蒸餾水。
A. 2  查氏培養(yǎng)基
A. 2. 1  成分
NaNO 3 3. 0g
K 2 HPO 4 1. 0g
KCL 0. 5g
MgSO 4 · 7H 2 O 0. 5g
FeSO 4 · 7H 2 O 0. 01g
蔗糖
30g
瓊脂
15g
蒸餾水
1000mL
A. 2. 2  制法
量取 600mL 蒸餾水分別加入蔗糖、 NaNO 3 、 K 2 HPO 4 、 KCl 、 MgSO 4 · 7H 2 O 、 FeSO 4 · 7H 2 O ,依次
逐一加入水中溶解后加入瓊脂,加熱融化,補(bǔ)加蒸餾水至 1000mL ,分裝后,
121℃ 滅菌 15min 。
A. 3  馬鈴薯 - 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基
A. 3. 1  成分
馬鈴薯(去皮切塊)
200g
葡萄糖
20. 0g
瓊脂
20. 0g
蒸餾水
1000mL
A. 3. 2  制法
將馬鈴薯去皮切塊,加 1000 mL 蒸餾水,煮沸 10 min~20 min 。用紗布過濾,補(bǔ)加蒸餾水至
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1000mL 。加入葡萄糖和瓊脂,加熱溶化,分裝后, 121℃ 滅菌 20min 。
A. 4  麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基
A. 4. 1  成分
麥芽汁提取物
20g
蛋白胨
1g
葡萄糖
20g
瓊脂
15g
A. 4. 2  制法
稱取蛋白胨、葡萄糖、瓊脂,加入麥芽汁提取物,適量蒸餾水,加熱溶化,補(bǔ)足至 1000mL ,分裝后,
121℃ 滅菌 20min 。
A. 5  無糖馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基
A. 5. 1  成分
馬鈴薯(去皮切塊)
200g
瓊脂
20. 0g
蒸餾水
1000mL
A. 5. 2  制法
將馬鈴薯去皮切塊,加 1000 mL 蒸餾水,煮沸 10 min~20 min 。用紗布過濾,補(bǔ)加蒸餾水至
1000mL ,加入瓊脂,加熱溶化,分裝后, 121℃ 滅菌 20min 。